农杆菌载体——Ti质粒的基本知识

本文介绍了农杆菌Ti质粒系统,包括T-DNA和Vir区的功能,以及Ti质粒的结构和改造过程。Ti质粒在植物遗传转化中的作用是将外源基因整合到植物基因组中,但野生型质粒存在一些缺点,如分子量大、限制性酶切位点多等。为了解决这些问题,科研人员通过改造构建了卸甲载体和植物转化载体系统,如一元载体和双元载体系统,用于高效地导入目的基因。

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赛思基因(www.scientsgene.com),专注遗传转化技术的应用于开发,致力于打破基因型限制,进行基因编辑育种。

农杆菌质粒载体系统

质粒载体系统中最常用的质粒有:Ti 质粒和 Ri 质粒。Ti质粒存在于根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中,Ri 质粒存在于发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenis)中。Ti 质粒和 Ri 质粒在结构和功能上有许多相似之处,具有基本一致的特性。但实际工作中,绝大部分采用 Ti 质粒。在这里小编也是给大家着重介绍一下Ti质粒的基本知识。

T-DNA区和Vir区

农杆菌质粒是一种能实现 DNA 转移和整合的天然系统。Ti 质粒有两个区域:

①T-DNA 区(是质粒上能够转移整合入植物受体基因组并能在植物细胞中表达从而导致冠瘿瘤的发生,且可通过减数分裂传递给子代的区域)

②Vir 区(编码能够实现 T-DNA 转移的蛋白)。

其中,T-DNA 长度为 12-24kb 之间,两端各有一个含 25hp 重复序列的边界序列,在整合过程中左右边界序列之间的 T-DNA 可以转移并整合到宿主细胞基因组中,研究发现只有边界序列对 DNA 的转移是必需的,而边界序列之间的T-DNA 并不参与转化过程,因而可以用外源基因将其替换。从而将外源基因导入到宿主的基因组中。

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