丝裂原活化蛋白激酶TaMPK3抑制植物对ABA的反应

文章信息

题目：Mitogen-activated protein kinase TaMPK3 suppresses ABA response by destabilising TaPYL4 receptor in wheat

刊名：New Phytologist

作者：Ying Liu，You-Zhi Ma, Zhao-Shi Xu et al.

单位：Institute of Crop Science

日期：20 June 2022‍

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摘要

脱落酸 (ABA) 受体被认为是植物中 ABA 敏感性和水分生产力的靶向操纵。对其稳定性或活性的调节将直接影响 ABA 信号传导。丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联连接多个环境和植物发育线索。然而，ABA 信号和 MAPK 级联相互作用的分子机制在很大程度上仍然难以捉摸。

TaMPK3过表达降低了干旱耐受性和小麦对 ABA 的敏感性，显着削弱了 ABA 对生长的抑制作用。在干旱胁迫下，过表达系的成活率、芽鲜重和脯氨酸含量较低，但在幼苗期丙二醛水平较高，并且在成年期温室和田间条件下的粒宽和千粒重均降低。TaMPK3 -RNAi 增加耐旱性。

TaMPK3 与 TaPYL4 的相互作用通过促进其泛素介导的降解导致 TaPYL4 水平降低，而 ABA 处理减少了 TaMPK3-TaPYL 相互作用。此外，在 ABA 处理下，过表达 TaMPK3 的小麦植物中 ABA 信号蛋白的表达受损。发现 MPK3-PYL 交互模块在单子叶植物和双子叶植物中是保守的。

我们的研究结果表明，MPK3-PYL 模块可以作为一种负调控机制，在小麦中平衡适当的干旱胁迫反应和正常的植物生长信号。

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技术路线

小麦品种“Fielder”（野生型，WT）用于扩增基因序列（TaMPK3和TaPYLs)

产生TaMPK3转基因小麦植物

ABA敏感性测定

小麦叶肉原生质体中的亚细胞定位和双分子荧光互补 (BiFC) 测定

酵母二杂交 (Y2H) 测定

烟草中的荧光素酶互补成像 (LCI) 和 BiFC 检测

体外pull down试验

Co-IP 检测

体外磷酸化测定

干旱处理

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主要结果

3.1 TaMPK3 与 TaPYL4 的互作

TaPYL4 先前已被证明参与调节小麦的耐旱性。为了拓宽我们对小麦中 PYL 的了解，TaPYL4 被用作 Y2H 筛选小麦 cDNA 文库的诱饵，该文库使用从干旱处理的小麦品种 Jimai60 的叶子中提取的 RNA 构建，以识别潜在的蛋白质相互作用。TaPYL4 的相互作用候选者列于表S6. 候选相互作用子的序列分析表明，MAPK 的 TaMPK3 表现出与 TaPYL4 的潜在直接相互作用。TaMPK3 包含典型的 MPK 特征基序，包括 ATP 结合特征 (IGRGAYGIVCSVMNFETREMVAIKK)、催化 C 环 (VIHRDLKPSNLLL)、激活 T 环 (TEY)、共同对接 (CD) 域 (LHDVADEPIC) 和 EF 手 CBP （RMLTFNPLQRITVEEAL）域（图S1）。与公共数据库 (NCBI) 的氨基酸序列比对显示，它编码的蛋白质与拟南芥 AtMPK3 (73.42%) 和水稻 OsMPK3 (91.33%) 具有高度序列相似性（表S7）。使用来自其他植物物种的 TaMPK3 及其直系同源物的全长氨基酸序列重建的系统发育树显示出来自单子叶植物和双子叶植物的 MPK3 之间的单独聚类，表明这些谱系之间存在潜在的功能分歧（图S2）。

进一步的证据表明，共表达 TaPYL4-AD 和 TaMPK3-BD 的酵母细胞能够在缺乏 Leu、Trp、Ade 和 His 的合成脱落选择培养基上生长（图 1a）。使用烟叶中的 LCI 分析，在 TaMPK3-nLUC/TaPYL4-cLUC 共注射区域可以观察到强发光信号，而在阴性对照的共注射区域未检测到信号（图1b）。然后，我们纯化了重组 GST 标记的 PYL4（TaPYL4-GST）和 MBP 标记的 TaMPK3（TaMPK3-MBP）用于 GST 下拉测定，这表明 TaPYL4-GST 蛋白可以下拉 TaMPK3-MBP 蛋白（图1c）。使用瞬时表达 TaPYL4-MYC 与 Flag 或 TaMPK3-Flag 的烟叶进行的进一步免疫共沉淀（Co-IP）测定证实 TaPYL4-MYC 可以被 TaMPK3-Flag 融合蛋白共免疫沉淀&