miR-155-5p靶向SEP15基因在H2O2诱导的人晶状体上皮细

摘要：目的 探讨miR-155-5p靶向SEP15基因对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及潜在机制。方法 用含100μmol·L-1 H2O2的培养液培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3建立H2O2损伤模型,根据处理和转染情况分为对照组、H2O2组、H2O2+anti-miR-NC组、H2O2+anti-miR-155-5p组、H2O2+pcDNA组、H2O2+pcDNA-SEP15组、miR-NC组、miR-155-5p组、H2O2+anti-miR-155-5p+si-NC组、H2O2+anti-miR-155-5p+si-SEP15组,Real-time PCR检测HLE-B3细胞中miR-155-5p和SEP15 mRNA的表达,Western blot测定SEP15、Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase-3蛋白的表达,ELISA测定H2O2诱导后HLE-B3中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,流式细胞术测定细胞凋亡率,Targetscan预测miR-155-5p与SEP15的结合关系,双荧光素酶检测验证miR-155-5p与SEP15的调控关系。结果 H2O2组HLE-B3细胞中miR-155-5p、SEP15 mRNA、SEP15蛋白、MDA、SOD、GSH-Px含量及凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H2O2+anti-miR-155-5p组和H2O2+anti-pcDNA-SEP15组的细胞凋亡率分别为(12.69±1.28)%和(14.67±1.52)%,分别与H2O2+anti-miR-NC组的(25.68±2.34)%和H2O2+pcDNA组的(23.65±2.17)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Targetscan预测miR-155-5p与SEP15存在结合位点,双荧光素酶检测结果显示,miR-155-5p组野生型WT-SEP-15的萤火虫荧光素酶相对活性为0.39±0.03,较miR-NC组的1.02±0.09显着降低(P=0.000)。与H2O2+anti-miR-155-5p-si-NC组相比,H2O2+anti-miR-155-5p+si-SEP15组的SEP-15蛋白、Bcl-2蛋白、SOD活性和GSP-Px含量均显着降低,Bax蛋白、MDA含量及细胞凋亡率均显着升高(均为P<0.05)。结论 miR-155-5p通过靶向SEP15基因以减轻H2O2对人晶状体上皮细胞HLE-B3的损伤并抑制细胞凋亡。
　　关键词：人晶状体上皮细胞; HLE-B3; miR-155-5p; SEP15; 细胞损伤; 细胞凋亡;

白内障是全球致盲和视力损害的重要原因[1],其主要是由晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)损伤引起的晶状体混浊[2]。研究表明,miR-155-5p在结核性脑膜炎[3]、类风湿性关节炎(RA)[4]和病毒性心肌炎[5]患者血浆或血清中的表达量均显着升高,是RA潜在诊断指标,可加重心肌细胞损伤并促进心肌细胞凋亡,说明miR-155-5p对细胞炎症损伤有重要作用。本研究通过TargetScan预测发现,相对分子质量为15 000的硒蛋白(15 000 Selenoprotein,SEP15)可能是miR-155-5p的靶基因。SEP15基因敲除的小鼠在出生1.5个月后就出现显着的核性白内障,表明SEP15为小鼠眼晶状体正常发育和生长所必需[6]。SEP15基因沉默加剧了高糖在LECs分化过程中对整合素的影响,说明SEP15对LECs的分化具有相应的保护作用[7]。SEP15基因敲减可促进衣霉素诱导的HLECs的凋亡和氧化应激[8]。但miR-155-5p及SEP15在H2O2诱导的人LECs(HLECs)中的表达、两者关系及对HLECs细胞损伤的影响目前还不清楚。本研究通过建立HLECs细胞系HLE-B3的H2O2损伤模型,研究miR-155-5p对H2O2诱导的HLE-B3细胞损伤、凋亡的影响,并探讨SEP15在此机制中的作用。

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