化学同位素标记的分子内H-D迁移结合LC-MS用于代谢物的定性分析

化学同位素标记的分子内H-D迁移结合LC-MS用于代谢物的定性分析

液相色谱质谱联用 (liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS) 技术由于具有高的检测灵敏度、并可以提供代谢物精准分子质量等信息，是目前非目标代谢组学分析常用的工具。在过去十年中，虽然LC-MS仪器的准确性、分辨率和分析速度均有所提高，但鉴于代谢物组成的复杂性，代谢物结构识别与鉴定仍然是非目标性组学分析的一个主要挑战。

       氢-氘交换 (hydrogen-deuterium exchange, HDX) 是一种氢原子被氘原子取代的化学反应。HDX结合LC-MS (HDX-LC-MS) 技术常用于蛋白组学中蛋白质高级结构的研究，其分析方法主要有两种方式。一种方式是利用氘代试剂的氘原子取代被分析分子中的活性H原子 (-OH, -COOH, -NH2, -SH) 实现定性分析，即在氘代试剂的氛围中，样品可以在LC分离过程或是离子源中完成HDX反应。随后，通过比较HDX反应前后目标物的分子质量差，可获得分子结构中的活性 H 原子数信息。然而，将HDX-LC-M策略用于代谢物分子鉴定分析时，由于 HDX 过程的可逆性可能导致分析结果的重现性较差，通常需要D2O或CD3OD作为流动相维持相应氘代分子稳定性，这使得分析成本相对较高。HDX-LC-MS的另一种方式是基于目标物本身结构含有活性D原子，当使用串联质谱对其进行分析时，目标物分子在质谱碰撞池内会发生分子内的H与D重排 (hydrogen-deuterium scrambling，HDS) 反应，通过观察多级质谱图，可解析目标物的碎裂路径，从而辅助鉴定目标分子。但这种方式对目标物自身结构要求很高，需要其在结构上含有活性D原子，故而在应用上受到了限制。

      利用化学同位素标记结合液相色谱高分辨质谱 (Liquid chromatography hi