番茄根围土传病

摘要

根系细菌在发挥抑制土传病害上发挥着重要作用，这种复合益生菌群能有效增强对病害的抗性。本文中作者介绍了 Pseudomonas 类群并且评价了他们对番茄病原菌 Ralstonia solanacearum的抗性效果。本文作者提出了通过不同的益生菌群来抑制病原菌的新机制。用益生菌替代农药来拮抗病原菌是一个非常有前景的方向。然而，我们应该选择多少以及哪一种微生物来发挥作用，目前还不是很清楚。研究表明了增加益生菌群落多样性能通过增强对营养物质的竞争来抑制病原菌。

本文作者结合温室实验和互补实验来研究促进植物生长的 Pseudomonas群落对病害抑制作用的机制以及其多样性的重要性。八种不同的产DAPG的 Pseudomonas的物种被用于本实验。选择他们的依据是很多研究表明他们能广泛的抑制病菌，并且广泛存在与根围中。作者使用简单的原位实验来定量假单胞菌类群与拮抗类群的关系。为了缩小实验室与真实环境的差距，作者评估了不同假单胞菌类群在高度多样性的番茄根围类型中的生存能力。 在接种假单胞菌类群之后，番茄的病症以及发病等级都显著的降低，然而只有当接种了8中假单胞菌的比接种单一的效果好10倍。

实验设计：

作者选取了8种不同的假单胞菌用于实验，所有菌株都保存在-80度的20%甘油中，使用时随机选取一个单克隆，在LB培养基上过夜生长，然后早0.85的NaCl溶液中洗三次，并且用分光光度计在600nm的吸光值在取0.5的读数。作者使用Ralstonia solanacearum 作为测试病原菌，该病原菌是从中国南京分离的。作者用这8种菌创造了48中不同的组合，包括含有1,2,4,8种菌的组合。在不同的组合中，保证所有菌的总浓度一定，菌的种类越多，单菌的浓度越低。为了把细菌多样性和抗性联系起来，作者使用了番茄根系分泌的单碳作为碳源，细菌在胰蛋白胨大豆肉汤培养基中过夜生长（1 L：胰蛋白胨15g；大豆蛋白胨：5g；NaCl：5g ），然后4000转，离心3分钟，在0.85%盐中洗三次，然后在96孔板的OS基本培养基中加入10nM的氨基酸，有机酸，蔗糖，最后吸光度为600nm, 0.05。作者进行了一个长达50天的种植实验，当幼苗长出3片真叶进行移植，生长10天后移植到含5x107次方假单胞菌的土中。在接种假单胞菌5天后再在土中加入106次方的病原菌R. solanacearum。每天都记录病情发展情况，分别在5,15,25,35天测定病原菌的浓度，具体做法是在每个采样时间点从每一个处理中，移除两株随机选择的一个有重复的幼苗块植株。去除表面可见的土壤，干冰运回实验室，保存在-80度中。用qPCR鉴定B2BF (5=-ACCCAC CGC AGC ATC GTT TAT GAG C-3=) and B2BR3 (5=-AGC AGA GCG ACG AGA ACT CCA GGG A-3=) targeting the phlD 基因来定量假单胞菌浓度。用基因(forward,5=-GAA CGC CAA CGG TGC GAA CT-3=; reverse, 5=-GGC GGC CTTCAG GGA GGT C-3=) targeting the fliC 定量病原菌浓度。

参考文献

Hu, J., Wei, Z., Friman, V. P., Gu, S. H., Wang, X. F., Eisenhauer, N., ... & Jousset, A. (2016). Probiotic diversity enhances rhizosphere microbiome function and plant disease suppression. MBio, 7(6), e01790-16