sam文件格式简介

简介
文件后缀名:.sam


bwa、Bowtie2是现下最流行的短序列比对软件，SAM(Sequence Alignment/Map)格式是一种通用的比对格式，用来存储reads到参考序列的比对信息。
SAM是一种序列比对格式标准，由sanger制定，是以TAB为分割符的文本格式。主要应用于测序序列mapping到基因组上的结果表示，当然也可以表示任意的多重比对结果。
不同的软件，不同的时期，不同的研究方向，都会创建一种或者多种格式标准，当然根据当时的需要，创建符合需求的标准，也是最容易的事情，而反过来想要真正的理解标准，也必须理解为什么要创建这样的标准，解决什么样的需要。我前面的有篇文章已经对于现有的多重比对的格式进行总结，但其更多的站在比较基因组学的角度。当我们去了解sam标准格式是什么的时候，就要思考既然以及有了这么多得标准，为什么还要定义SAM标准，当然拿所有的格式进行比较也并非易事，但是简单的对比，就可以了解其中一二，比如aln格式，是比对视图化的展示，存储的信息不够结构化，无法方便的作为另外程序的输入；表示信息的有限性，如果100个多重比对序列放到一个文件中，查看维护就会非常困难；还有些格式标准挺强大，但是太繁琐，同时不够灵活。那么反过来就是SAM格式的优点，那么SAM如何做到这一点的呢？


SAM要处理好的问题：


1. 非常多序列（read)，mapping到多个参考基因组（reference）上；
2. 同一条序列，分多段（segment）比对到参考基因组上；
3. 无限量的，结构化信息表示，包括错配、删除、插入等比对信息；
行、列、注释说明
SAM分为两部分，注释信息（header section）和比对结果部分（alignment section）。
行：除注释外，每一行是一个read
注释信息可有可无，都是以@开头，用不同的tag表示不同的信息，主要有：


1.@HD，说明符合标准的版本、对比序列的排列顺序；
2.@SQ，参考序列说明；
3.@RG，比对上的序列（read）说明；
4.@PG，使用的程序说明；
5.@CO，任意的说明信息。
比对结果部分（alignment section），每一行表示一个片段（segment）的比对信息，包括11个必须的字段（mandatory fields）和一个可选的字段，字段之间用tag分割。必须的字段有11个，顺序固定，不可用时，根据字段定义，可以为’0’或者’*’，这是11个字段包括：


1. QNAME    比对片段的（template）的编号；read name，read的名字通常包括测序平台等信息
# eg.ILLUMINA-379DBF:1:1:3445:946#0/1
2. FLAG     位标识，template mapping情况的数字表示，每一个数字代表一种比对情况，这里的值是符合情况的数字相加总和；flag取值见备注(3)
# eg.16
3. RNAME    参考序列的编号，如果注释中对SQ-SN进行了定义，这里必须和其保持一致，另外对于没有mapping上的序列，这里是'*'；
# eg.chr1
4. POS      比对上的位置，注意是从1开始计数，没有比对上，此处为0;
# eg.36576599
5. MAPQ     mappint的质量,，比对的质量分数，越高说明该read比对到参考基因组上的位置越唯一;
# eg.42
6. CIGAR    简要比对信息表达式（Compact Idiosyncratic Gapped Alignment Report），其以参考序列为基础，使用数字加字母表示比对结果，match/mismatch、insertion、deletion 对应字母 M、I、D。比如3S6M1P1I4M，前三个碱基被剪切去除了，然后6个比对上了，然后打开了一个缺口，有一个碱基插入，最后是4个比对上了，是按照顺序的；
# eg.36M 表示36个碱基在比对时完全匹配


###注：第七列到第九列是mate(备注1)的信息，若是单末端测序这几列均无意义###


7. RNEXT    下一个片段（即mate）比对上的参考序列的编号，没有另外的片段，这里是'*'，同一个片段，用'='；
# eg.*
8. PNEXT    下一个片段（即mate）比对到参考序列上的第一个碱基位置，若无mate,则为0；
# eg.0
9. TLEN     Template的长度，最左边得为正，最右边的为负，中间的不用定义正负，不分区段（single-segment)的比对上，或者不可用时，此处为0(ISIZE，Inferred fragment size.详见Illumina中paired end sequencing 和 mate pair sequencing，是负数，推测应该是两条read之间的间隔(待查证)，若无mate则为0);
# eg.0
10. SEQ     序列片段的序列信息，如果不存储此类信息，此处为'*'，注意CIGAR中M/I/S/=/X对应数字的和要等于序列长度；
# eg.CGTTTCTGTGGGTGATGGGCCTGAGGGGCGTTCTCN
11. QUAL    序列的质量信息,read质量的ASCII编码。，格式同FASTQ一样。
# eg.PY[[YY_______________QQQQbILKIGEFGKB
12.第十二列之后：Optional fields，以tab建分割。详见备注(2)
# eg.AS:i:-1 XN:i:0 XM:i:1 XO:i:0 XG:i:0 NM:i:1 MD:Z:35T0 YT:Z:UU
可选字段（optional fields)，格式如：TAG:TYPE:VALUE，其中TAG有两个大写字母组成，每个TAG代表一类信息，每一行一个TAG只能出现一次，TYPE表示TAG对应值的类型，可以是字符串、整数、字节、数组等。


要注意的几个概念，以及与之对应的模型：


·   reference
·   read
·   segment
·   template（参考序列和比对上的序列共同组成的序列为template）
·   alignment

·   seq

扩展
备注
(1)mate，在Illuminated中有两种测序技术：paired end sequencing，mate pair sequencing。这两种测序都是测的一个片段的两端，这两端产生的reads被称为mate1，mate2，单末端测序则无mate。


(2)Optional fields：


AS:i:<N>
    Alignment score.可以为负的，在local下可以为正的。 只有当Align≥1 time才出现
XS:i:<N>
    Alignment score for second-best alignment.  当Align>1 time出现
YS:i:<N>
    Alignment score for opposite mate in the paired-end alignment.   当该read是双末端测序中的一条时出现
XN:i:<N>
    The number of ambiguous bases in the reference covering this alignment.（推测是指不知道错配发生在哪个位置，推测是针对于插入和缺失，待查证）
XM:i:<N>
    错配碱基的数目
XO:i:<N>
    The number of gap opens(针对于比对中的插入和缺失)
XG:i:<N>
    The number of gap extensions(针对于比对中的插入和缺失)
NM:i:<N>
    The edit distance(read string转换成reference string需要的最少核苷酸的edits:插入/缺失/替换)
YF:Z:<S>
    该reads被过滤掉的原因。可能为LN(错配数太多，待查证)、NS(read中包含N或者．)、SC(match bonus低于设定的阈值)、QC(failing quality control，待证)
YT:Z:<S>
    值为UU表示不是pair中一部分(单末端？)、CP(是pair且可以完美匹配)
    DP(是pair但不能很好的匹配)、UP(是pair但是无法比对到参考序列上)
MD:Z:<S>
    比对上的错配碱基的字符串表示
(3)flag取值


0：比对到参考序列的正链上（待求证)
1：是paired-end或mate pair中的一条
2：双末端比对的一条
4：没有比对到参考序列上
8：是paired-end或mate pair中的一条，且无法比对到参考序列上
16：比对到参考序列的负链上
32：双末端reads的另一条（mate）比对到参考序列的负链上
64：这条read是mate 1
128：这条read是mate 2
参考：
SAM的定义：
SAM1.pdf
samtools:
samtools
发表的文献：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2723002/
CIGAR的概念
http://asia.ensembl.org/common/Help/Glossary?db=core
一篇博客对于sam的解释
博耘生物
SAM格式-Bowtie2
http://davetang.org/wiki/tiki-index.php?page=SAM
perl模块
http://search.cpan.org/~lds/Bio-SamTools/lib/Bio/DB/Sam.pm