导读
随着疫情防控的常态化,核酸检测和抗原检测的概念已经深入人心。目前基于qPCR的核酸检测是新冠检测的金标准,灵敏度高特异性强,但是也存在操作麻烦、检测周期长、需要专业的实验室及操作人员等缺点。相比之下,基于免疫侧向层析技术开发的新冠抗原检测胶体金试纸条则更为方便快捷,能够实现居家检测,但是也存在着灵敏性不够等问题。那么是否能够用试纸条的方式去检测核酸呢?既能够实现高灵敏性,也能够降低检测门槛和周期。
核酸侧向层析技术核酸试纸条属于核酸侧向层析技术(NALF),也是一种常用的核酸POCT检测技术。核酸试纸条使用方便快捷,成本低,能够在居家、野外、基层诊所进行快速诊断,因此在医学诊断、环境和食品监测等领域都有着广泛的使用。
在用核酸试纸条进行检测时,只需要将PCR或者等温扩增(RPA或者LAMP等)产物加到检测试纸条上,如果PCR产物中有目的条带,试纸条上的检测线和质控线都会显色;反之,若PCR产物中没有目的产物,则只有质控线显色。
核酸侧向层析技术的检测原理
核酸侧向层析一般采用抗体夹心法检测,以常用的核酸检测试纸条为例,首先用两种小分子半抗原,硫氰酸荧光素(FITC)和生物素(Biotin),分别对上下游引物进行标记,这样目的片段的扩增产物两端分别带上了FITC和Biotin的标记。然后再将扩增产物与带有链霉亲和素(streptavidin)标记的红色颗粒混合,由于streptavidin能够和目的片段扩增产物中的Biotin结合,因此目的片段扩增产物会大量结合streptavidin-红色颗粒。
试纸条有一条质控线和一条检测线,其中质控线预包埋有Biotin,能够拦截扩增产物中游离的streptavidin-红色颗粒,因此,正常情况下,质控线都会显红色。而检测线处预包埋有FITC抗体,能够拦截扩增产物中带有FITC标记的目的扩增片段,因此如果扩增产物中如果有目的片段的扩增,检测线和质控线都会显红色条带。
另外,核酸试纸条同样也支持多重检测,只需要在试纸条上多设置一些检测线,每条检测线都预包埋不同的小分子标记物抗体,比如抗地高辛(Digoxigenin, DIG)抗体,抗6-羧基荧光素(6-FAM)抗体,抗2,4-二硝基苯(DNP)抗体等,图一是一个双标核酸检测试纸条的结构和工作原理(图一)。
![1a7b76d34dbe147304ae8b75d2c513dd.jpeg](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/aa4bf9c867ae88e761636985a0651ac8.jpeg)
目前市面上有很多通用的核酸检测试纸条产品(单标、双标或者多标),在核酸试纸条检测产品开发时,只需要搭配好相应的扩增试剂(传统PCR或者等温扩增)以及经过标记的特异引物,即可实现对特定基因的快速检测。另外,美籍华人科学家张锋开发SHERLOCK(检测RNA)和DETECTR(检测DNA)检测技术,也是利用到了核酸侧向层析技术,在SHERLOCK和DETECTR中,检测试纸条检测线上预包埋的是胶体金标记的FAM抗体。在新冠检测方面,美国的Mesa Biotech公司(目前已被Thermo Fisher以5.5亿美元收购)开发的Accula SARS-CoV-2检测产品也是利用了核酸侧向层析技术,该产品在2020年获得了FDA的紧急使用授权。
武汉爱博泰克生物科技有限公司(ABclonal)是一家生命科学研究工具企业,产品线涵盖抗体、分子、CRO订制服务等。ABclonal自主开发的第四代兔重组兔单抗开发平台,在小分子半抗原的抗体开发上具有显著的优势。核酸侧向层析技术中需要大量使用到的FITC、Digoxigenin等核酸标记物小分子半抗原抗体,ABclonal都已成功开发了兔单抗产品,目前货源充足,欢迎咨询!
![ebf9e47a3cf1806631696abdcb45f795.jpeg](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/06bc9a40a111f765b4cf509196c3ac67.jpeg)
Digoxin Rabbit mAb
The Digoxin rabbit monoclonal antibody (A20267) are tested in Dot Blot against digoxin labelled oligonucleotide(Dig-1,Dig-2 and Dig-3) and unlabelled oligo nucleotide(Dig-4)
Dig-1 :5'AGCTAAC/iDigdT/ACTAGCT(Biotin)3'
Dig-2 :5'(Digoxin)AGCTAACTACTAGCT(Biotin)3'
Dig-3 :5'(Biotin)AGCTAACTACTAGCT(Digoxin)3'
Dig-4 :5'AGCTAACTACTAGCT(Biotin)3'
The Digoxin rabbit monoclonal antibody (A20267) are tested in ELISA against digoxin labelled oligonucleotide(Dig-1,Dig-2 and Dig-3) and unlabelled oligonucleotide(Dig-4)
Dig-1 :5'AGCTAAC/iDigdT/ACTAGCT(Biotin)3'
Dig-2 :5'(Digoxin)AGCTAACTACTAGCT(Biotin)3'
Dig-3 :5'(Biotin)AGCTAACTACTAGCT(Digoxin)3'
Dig-4 :5'AGCTAACTACTAGCT(Biotin)3'
A20797 Fluorescein FITC Rabbit mAb
The Fluorescein FITC rabbit monoclonal antibody (A20797) are tested in Western blot against FITC Goat Anti-Mouse IgG (H+L),TRITC Goat Anti-Mouse IgG (H+L) and Goat Anti-Mouse IgG (H+L)Secondary antibody: HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) at 1:10000 dilution.Lysates/proteins: Refer to figures.Blocking buffer: 3% nonfat dry milk in TBST.Detection: ECL Basic Kit (RM00020).Exposure time: 10s.
ABclonal
公司简介
武汉爱博泰克生物科技有限公司(ABclonal Technology Co.,Ltd.)成立于2011年,作为生命科学解决方案的提供商,旨在为更多的科研工作者、IVD企业、新技术开发企业提供抗体、酶、NGS产品和蛋白制品等全套解决方案。
ABclonal现有波士顿抗体与蛋白研发中心、上海诊断与科研分子酶产品研发基地以及中国武汉光谷诊断与科研免疫产品生产和研发基地。经过多年的深耕与发展,ABclonal已拥有免疫与分子酶两大技术平台,集新型分子酶、全领域应用NGS建库解决方案、新平台单克隆抗体与高活性蛋白制品的研发与生产于一体。ABclonal致力成为产业科研转化的核心企业,向生命科学研究工作者和应用企业提供全套可靠的技术解决方案。