由广州南方医科大学南方医院血液科的Na Xu , Xuan Zhou, Shuang Wang等人发表的一篇名为“Artesunate Induces SKM-1 Cells Apoptosis by Inhibiting Hyperactive β-catenin Signaling Pathway”的文章中探讨了ART对MDS细胞系SKM-1的增殖抑制和凋亡诱导作用,并揭示其潜在的分子机制。其中应用了AbMole的Artesunate(CAS号:88495-63-0)。
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髓系发育不良综合征(MDS)是一类以造血干细胞分化能力受损为特征的血液疾病,约30%的患者最终会转化为急性髓系白血病(AML),预后极差。尽管已有多种治疗方法,但大多数仅能缓解症状,因此亟需新型治疗策略。近年来,青蒿琥酯(ART),一种广泛用于治疗严重疟疾的药物,被发现具有抑制多种肿瘤生长的能力。
MTT实验结果显示,ART以剂量和时间依赖的方式显著抑制SKM-1细胞的增殖(图1)。随着ART浓度的增加和处理时间的延长,细胞存活率逐渐下降。计算得到的IC50值分别为24小时61.18µg/mL、48小时38.39µg/mL和72小时28.56µg/mL。
图1ART对SKM-1细胞增殖的影响
流式细胞术和Hoechst33342染色结果均表明,ART处理显著增加SKM-1细胞的凋亡率(图2)。随着ART浓度的增加,早期和晚期凋亡细胞的比例tu均显著上升。Hoechst33342染色也观察到ART处理组细胞核浓染、碎裂等典型的凋亡形态学改变。
图2 ART对SKM-1细胞凋亡的影响
MSP结果显示,未处理的SKM-1细胞中CDH1基因启动子区域呈甲基化状态,而经50µg/mL ART处理48小时后,甲基化条带消失,未甲基化条带出现(图3)。这表明ART可能具有去甲基化作用,从而恢复CDH1基因的表达。
图3 ART对CDH1基因表达的影响
Western blot分析显示,ART处理导致E-cadherin蛋白表达显著增加,而β-catenin蛋白在全细胞裂解液中的表达水平无显著变化(图4)。然而,β-catenin的下游靶标c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平显著下降。此外,LSCM结果显示,ART处理后β-catenin从细胞核和细胞质向细胞膜转位,与E-cadherin形成复合物(图5)。这些结果表明ART通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来诱导SKM-1细胞凋亡。
图4 ART对Wnt/β-catenin通路中蛋白表达的影响
图5 LSCM用于检测E-钙粘蛋白和β-连环蛋白亚细胞定位
本文首次揭示了ART通过去甲基化CDH1基因、恢复E-cadherin表达以及抑制Wnt/β-catenin信号通路来诱导SKM-1细胞凋亡和增殖抑制的分子机制。ART作为一种潜在的新型抗肿瘤药物,在MDS治疗中具有广阔的应用前景。未来研究可进一步探索ART与其他化疗药物的联合应用效果,以提高MDS患者的治疗响应率和生存率。