荧光素绿色荧光FITC-HA标记透明质酸钠/牛血清蛋白BSA的制备方法

荧光素绿色荧光FITC-HA标记透明质酸钠/牛血清蛋白BSA的制备方法

今天小编分享荧光素标记牛血清蛋白BSA,一起看看吧:

荧光素标记牛血清蛋白BSA的制备过程：

称取FIIC 及HSA ,分别溶解于(BS(pH 9.60)中,搅拌,将FITC溶液缓慢滴入HSA溶液,避光反应5 h ,其间用0. 1 molL-1碳酸钠溶液维持反应的pH在9.0～9.5之间。反应毕,反应液对PBS透析、过Sephadex G50层析柱LKB仪检测蛋白(流速0.5 ml min')。收集LKB记录仪上DY流出峰及柱上DY荧光带所共同对应的流出液,紫外法测定流出液中蛋白含量(入 =280 nm)及荧光素含量,以标准曲线法定量,按公式"计算产物分子中 FrIC 与 HSA 结合的摩尔比F ^/P)。FIC-HSA标记物制成冻干制品,分装,0℃保存。

由图谱可知,FITC的入ex = 500 nm ,入em = 520 nm;标记后FITC-HSA的入cx = 512 nm ,入em = 528 nm ,zd激发波长与发射波长均发生红移,使荧光的stokes位移有所降低。为了减少蛋白分子的散射干扰,增大 stokes位移,可选取扫描光谱上主峰两侧的某一波长进行测定。由图2可见,500 nm处FITC-HSA的激发光谱基本无干扰,故选用500 nm 作为激发波长,发射波长选取530 nm ,对系列浓度的FITC-HSA进行测定,FITC-HSA浓度与荧光强度之间具有良好的线性关系(r =0.9991)。说明选定的激发与发射波长可行。

荧光染料中，还含有罗丹明、 BDP类荧光染料（BAI）和β-萘胺类荧光染料（AEF）。其中，β-萘胺染料具有较高的荧光强度、较好的光稳定性、较宽的吸收范围和较高的灵敏度。

异硫氰酸荧光素是一种低分子化合物，其发光时间可达几秒至几分钟，而普通的荧光指示剂只能持续数十至几分钟。异硫氰酸荧光素因其发光寿命长、光稳定性好、光稳定性好而被广应用于“绿色”环境保护的新一代荧光指示剂。

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仅用于科研，RL2023.2