蛋白质翻译后修饰

  蛋白质翻译后修饰

前体蛋白是没有活性的，常常要进行一个系列的翻译后加工，才能成为具有功能的成熟蛋白。加工的类型是多种多样的，一般分为四种：N-端fMet或Met的切除，二硫键的形成；化学修饰和剪切。

一、N-端f-Met或Met的切除

原核生物的肽链，其N- 端不保留fMet，大约半数蛋白由脱甲酰酶（deformylase）除去甲酰基，留下Met作为第一个氨基酸；在原核及真核细胞中fMet或者Met一般都要被除去，此是由氨肽酶（amino peptidase）水解来完成的。水解的过程有时发生肽链合成的过程中，有时在肽链从核糖体上释放以后。至于脱甲酰还是除去fMet常与邻接的氨基酸有关。如第二氨基酸是Arg,Asn,Asp,Glu,Ily或Lys以脱甲酰基为住，如邻接的氨基酸是AAly,Gly,Pro,Thr或Val则常除去 fMet。

二、二硫键的形成

两个半胱氨酸相距较远硫氢基可以氧化成二硫键，产生mRNA中没有相应密码子的胱氨酸。

三、化学修饰

化学修饰是蛋白质加工的重头戏，修饰的类型也很多，包括磷酸化（如核糖体蛋白的Ser，Tyr和Trp残基常被磷酸化）；糖基化（如各种糖蛋白）；甲基化（如组蛋白，肌蛋白），乙基化（如组蛋白），羟基化（如胶原蛋白）。还有各种辅基如大卟啉环结合在叶绿蛋白和血红蛋白上。

糖基化是真核细胞中特有的加工，这些蛋白常和细胞信号的识别有关，如受体蛋白等。

 (一)折叠

在ER 腔中折选和修饰是有关的，糖的连接对于正确的折叠是十分必要的。蛋白二硫异构酶（protein disulfide isomerase，PDI）可以改变二硫键，影响到折叠，它和特殊的ER蛋白的结合是必须的，此酶的某些活性或全部的活性可能是酶作为ER中的一种复合体的形式来实现的。即在越膜位点和蛋白结合才能发挥它的功能。通过对折叠和寡聚物产物的计算表明折叠需要一种酶来催化，使其在细胞中迅速发生。

一个与折叠功能有关的蛋白是BiP，它是分子伴侣Hsp70家族的一个成员。BiP促使寡聚物的形成ER腔中蛋白的折叠。ER可能含有各种辅助蛋白，它们的功能是识别蛋白折叠的形态，以帮助这些蛋白产生一种构象，使其可迅速地转运到下一个目标。

大部分膜上的糖蛋白，都是寡聚物，一般在ER中寡聚，然后迅速地从ER转到高尔基体，但不装配亚基或者防止蛋白锚装配。错折叠（misflided）的蛋白常和BiP相联，在这种情况下他们会被降解掉，若折叠正确，那么就可以转运到高尔基体或继续转运。

BiP 有两个功能：(1)帮助转运蛋白折叠；(2)切除错折叠蛋白。据推测BiP识别一定的肽顺序，而在正确叠成熟蛋的构象中是这种顺序不在外围，当刚进入ER 腔中的新生肽这些顺序露在外面，就会附着到BiP上。当某种蛋白发生了错折叠或变性的话，这种顺序就露在外表面上，所以可被BiP识别和结合。但现在还不清楚一个持久的错折叠的蛋白，怎样作为降解的目标，它们是否和BiP连接。

 (二)在ER中的糖基化及修整

实际上所有的分泌蛋白和膜蛋白几乎都是被糖基化

的蛋白。糖基化有两种类型：（1）糖蛋白是由寡糖连接在Asp的氨基的形成的，连接的链叫N-糖苷键。（2）寡糖连接在Ser、Thr或羟基-lys的羟基上（O-糖苷键）。N-糖苷键是在ER开始，而在高尔基体中进一步完成；O-糖苷键（o-linked glycosylation）的形成仅发生在高尔基体中。

N- 糖基化可分为3步，各种N-连接的寡糖都是在ER中开始加上的，途径也相同。一个寡糖含有2个N-乙酰-糖胺（N-acetyl- glucosamine），9个苷露糖和3个葡萄糖，在一种特异的脂一多萜醇（dolichol）上形成，多萜醇磷酸酯即是携带糖的载体。多萜醇是一种高度疏水的酯，位于ER膜中，其活性基团面向着ER腔，寡糖是由单个的糖连接而构成，它通过焦磷酸和多萜醇连接。寡糖作为一个单位在与膜结合的糖基转移酶（goycosyl transferase enzyme）的作用下从多萜醇上转移到靶蛋白上。酶的活性位点也是露在ER腔中。受体基团是位于Asn-X-Ser或Asn-X-Thr（X是除Pro 以外的任何氨基酸）中的Asn，当新生肽进入ER时，它一旦被识别后立即作为靶顺序暴露在腔中。有些寡糖的修整是在ER中进行，修整后再进入高尔基体。寡糖结构完成是分为两类，一类在转运到ER时，另一类是在越膜转运到高尔基体。究竟属于何种类型这要取决于苷露糖。苷露糖只是在ER中加上，随后可能还要被修整。在ER中被切去的单糖的数目是不同的。ER中的苷露糖苷酶（ER mannosidase）很快地附着到第一个苷露糖上，附着下三个较慢。

高甘露糖寡聚糖（High mannose oligosaccharides）含有的残基是在ER中加上的。寡糖加上后几乎立即又从蛋白上被切掉。3个葡萄糖残基被ER中的葡萄糖苷酶（glucosidasesⅠ和Ⅱ）切除掉，ER中的甘露糖苷酶再从蛋白上切下2-4个甘露糖，在ER中产生3寡糖的最终结构。

 (三)在高尔基表的进一步加工

复合寡聚糖（complex oligosacchrarides）是在高尔基体中进一步修整和加上糖的残基。第一步是通过高尔基体的甘露糖苷酶Ⅰ修整甘露糖残基。然后单个的糖基由 N-乙酰-葡萄糖胺转移加上，按着由高尔基体苷露糖苷酶Ⅱ继续切除苷露糖残基。在这一位置上寡糖通过内-糖苷酶H（endo-glycosidase H,Endo H）使寡变成对降解产生抗生。对Endo H的易感性（snsceptiblilty）被用来作为一种测验，从而测定一个糖蛋白是处于什么阶段。

在高尔基体的修饰中都会产生内部核心（inner core），它是由NAc-Glc·NAc-GLc.Man3构成，最后要被剥去。末端区域（terminal region）加在内部核心下。末端区域的残基包括NAc-GLc，Gal和唾液酸（N-乙酰-神经氨[糖]酸。此加工的路径和糖基化是高度有序的，而且有两种类型的反应。一种糖残基的加入对于另一种糖基的剪切可能是必要的。如在最终剪除甘露糖之前要加上NAc-Glc。

现在还不知道加工过程中各种蛋白的降解，加工的模式及糖基化的信号是什么。据推测此信号在肽链的结构中，而不可能在寡糖中，因为N-糖苷键开始形成都是加上相同的寡糖。

四、剪切

很多的前体蛋白要经过剪切后方可成为成熟的蛋白。

在原核生物中常常产生一种多蛋白的前体要经剪切后才能成为成熟的蛋白，如反转录病毒中有3个基因gag，pol和env，其中pol基因长约2900NT，其产物经剪切后产生反转录酶，内切酶和蛋白酶三种蛋白。其它两个基因的产物也要经过加工才能产生核心蛋白和外壳蛋白。

在真核生物中有些蛋白要经过切除才能成为有活性的成熟蛋，最有名的例子是高等生物的胰岛素，它是一种分泌收白，具有信号肽。新合成的前胰岛素原（preproinsulin），在ER中切除信号肽变成了胰岛素原（proinsulin），它是单链的多肽，由3个二硫键将主键连在一起，弯曲成复杂的环形结构。分子由A链（21aa）B链（31aa）和C链（33aa）三个连续的片段构成。当转运到胰岛细胞的囊胞中，C链被切除，成为由A，B两条分开的链由3个二硫键连结成成熟的胰岛素。

蛋白内含子又称为内蛋白子（intein）是近年发现的一种新的翻译后加工的产物。它是1994年由Perler等首先提出的。蛋白外显子又称为外蛋白子（estein）。内蛋白子的基因不是单独的开放阅读框（ORF）它是插入在外蛋白子的基因中和内含子的区别在于它可以和外蛋白子的基因一道表达，而不是其mRNA被切除，产生前体蛋白以后再从前体中被切除掉，余下的外蛋白了连接在一起成为成熟的蛋白，这也不同于胰岛素，胰岛素的A键和B键本身是不相连接的，仅仅通过二硫键将两个片段连在一起。

内蛋白子的基因除了上下代的垂直传递以外，还可以通过基因的转变（gene coversion）而进行水平传递，被称之为内蛋白子归巢（intein homing）

现发现的内蛋白子有7 种，多分布于酵母和微生物中，内蛋白子的分子量为40-60KDa，有高度保守的末端氨基酸：N-端常为Cys或Ser，C-端总是His-Asn。内蛋白子未剪切前称融合内蛋白子（fused intein），可催化前体的自我剪接反应；剪切后的内蛋白子称游离内蛋白子（free intein），可作为归巢内切酶（homing endonuclease）参与内蛋白子的归巢。它可识别dDNA上内蛋白子基因在外蛋白子基因子的插入位点。

 

转载自 生命经纬