Trizol法提取RNA实验步骤

细胞中的RNA可分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类，一般的总RNA提取实验实质就是将细胞裂解、释放出RNA，并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质，最终获得高纯RNA产物的过程。

 

目前普遍使用的RNA提取方法有两种：Trizol法和柱离心法，现在主要介绍一下Trizol法的基本原理及实验步骤

 

需要的试剂：

• 氯仿

• 异丙醇

• 75%乙醇（in DEPC-treated water)

• RNase free水或者0.5% SDS溶液 [准备不含RNase的水，将其装入不含RNase的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate (DEPC) to 0.01% (v/v)。静置过夜，然后高压灭菌。0.5% SDS溶液必须用DEPC预处理、高压灭菌的水]

 

1、组织匀浆

(1) 取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。

(2) 每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。

(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋白复合体。

 

文章剩余内容<<<<<