基因组生物信息实验(二):整体流程概述

本次基因组实验对象为 Saccharomyces cerevisiae(YJM1386);
实验主线为两条,第一为基因组测序模拟,用模拟后的结果进行序列
组装;第二为基因组注释,并将注释结果可视化。

step1:基因组模拟测序和组装及其分析
使用 art_illumina 程序,对下载基因组序列进行测序平台为 Hiseq2000 的全基因组测序模拟。实验结果发现随着测序深度(f)的增大,覆盖率也随之增大,且 f 小于 10 时对覆盖率影响较大。其次,对 f 为 45,插入片段分别为 180、3000 的测序结果进行
fastqc 质控分析、bowtie2+samtools 比对统计分析、SOAPdenovo 基因组组装、QUAST 组装结果分析。质控和比对结果都较好;组装结果为 319 个 scaffolds, 65076 个 gaps overall,N50=268762,N90=54889;QUAST 计算组装覆盖率为 87.78%。

step2:基因组注释
基因组注释:使用 tblastn+ blast92gff3.pl 进行同源预测,发现 40853 个基因;使用augustus+blastp 进行从头预测,发现5427 个基因;使用隐马尔可夫模型+R 进行启动子元件预测,结果 70%的 TATAbox 到其对应的最近基因距离小于 4170bp。利用 gffcompare对注释结果和参考注释文档进行比对,发现从头预测结果比同源预测更好。

step3:基因组注释可视化
使用 IGV 软件实现同源预测、从头预测、启动子元件预测等结果和参考基因组注释文件的可视化。

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Usage: /home/chenlianfu/chenlianfu_scripts/blast.pl [options] BLAST_DB file.fasta > out.txt --tmp-prefix default: blast 设置临时文件或文件夹前缀。默认设置下,程序生成command.blast.list,blast.tmp/等临时文件或目录。 --chunk default: 10 设置每个数据块的序列条数。程序会将输入FASTA文件中的序列从前往后分割成多份,每10条相邻的序列分配到一个FASTA文件中;在blast.tmp/临时文件夹下生成次级文件夹,每个文件夹做多放置10个FASTA文件;每个fasta文件写出一条BLAST命令到command.blast.list文件中;然后程序调用ParaFly进行并行化计算。 请注意:若数据块的数量超过100万个,默认设置下blast.tmp/文件夹中的目录数量太多(超过1万个),导致文件系统运行缓慢,ParaFly程序运行效率低下,无法充分利用服务器计算资源。此时推荐设置--chunk参数值为100。 --blast-program default: blastp 设置运行的BLAST命令,支持的命令有:blastn, blastp, blastx, tblastn, tblastx。 --CPU default: 1 设置并行运行的BLAST程序个数。 --blast-threads default: 1 设置BLAST命令的-num_threads参数值。该参数让每个BLAST命令可以多线程运行。 请注意:--blast-threads参数值和--CPU参数值的乘积不要超过服务器的CPU总计算线程数。 --evalue default: 1e-3 设置BLAST命令的-evalue参数值。 --outfmt default: 5 设置BLAST命令的-outfmt参数值。输出方式。若为5,则输出xml格式结果,若为6或7,则输出表格结果。 --max-target-seqs default: 20 设置BLAST命令的-max_target_seqs参数值。该参数设置BLAST最多能匹配数据库中的序列数量。 -clean 若添加该参数,则在运行程序成功后,会删除临时文件或文件夹。

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