PubMed-Gene搜索需要克隆的基因
找到CDS区域,注意有的基因有很多isoform, 但大部分isoform的CDS区域相似,找常见或表达量较高的,或根据自己实验需要特定的isoform找到基因的CDS区域序列
打开SnapGene 软件-new DNA file, 粘贴CDS序列
分析其酶切位点
同时找到自己需要克隆载体的序列,分析多克隆位点(multiple cloning site, MCS)包含的酶切位点
找到MCS有的,而且不包括在克隆片段中的酶切位点
Kpn1 Acc65I BamHI NotI