Bulk RNA-Seq转录组学习

本文是一篇关于RNA-Seq转录组分析的系列教程,涵盖工作环境准备、读取数据、理解fastq、参考基因组与基因注释、序列比对、reads计数、差异表达分析和富集分析等步骤。介绍了关键工具和概念,如DEXSeq、FastQC、Picard、RSeQC、Salmon、HISAT2、STAR、FPKM和TPM等。
摘要由CSDN通过智能技术生成

与之对应的是single cell RNA-Seq,后面也会有类似文章。

参考:https://github.com/xuzhougeng/Learn-Bioinformatics/

作业:RNA-seq基础入门传送门

资料:RNA-seq Data Analysis-A Practical Approach(2015)

Bioinformatic Data Skill

biostar handbook

A survey of best practices for RNA-seq data analysis

Gaining comprehensive biological insight into the transcriptome by performing a broad-spectrum RNA-seq analysis

Detecting differential usage of exons from RNA-seq data

转录组入门(1): 工作环境准备

miniconda2

cd src
wget https://repo.continuum.io/miniconda/Miniconda2-latest-Linux-x86_64.sh
bash Miniconda2-latest-Linux-x86_64.sh
conda config --add channels https://mirrors.tuna.tsinghua.edu.cn/anaconda/pkgs/free/
conda config --add channels https://mirrors.tuna.tsinghua.edu.cn/anaconda/cloud/conda-forge/
conda config --add channels https://mirrors.tuna.tsinghua.edu.cn/anaconda/cloud/msys2/
conda config --add channels bioconda
conda config --set show_channel_urls yes

在里面安装各种工具

conda create -n biostar sra-tools fastqc hisat2 samtools htseq

 

转录组入门(2):读文章拿到测序数据

AKAP95 regulates splicing through scaffolding RNAs and RNA processing factors. Nat Commun 2016 Nov 8;7:13347. PMID: 27824034

GSE81916,https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/

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当然!下面是一个简单的 bulk RNA-seq 教程,帮助您了解如何进行 bulk RNA-seq 实验和分析。 步骤1:实验设计 - 确定您的研究目的和问题。 - 选择适当的生物样本和处理。 - 设计实验,包括处理和对照,并考虑技术重复。 步骤2:样本准备和RNA提取 - 从每个样本中收集细胞或织。 - 使用RNA提取试剂盒从细胞或织中提取总RNA。 - 在提取过程中,确保避免RNA降解。 步骤3:文库制备 - 使用RNA-seq试剂盒对总RNA进行磷酸化、逆转录和扩增。 - 为了减少批次效应,可以使用技术重复。 步骤4:高通量测序 - 将文库加载到Illumina或其他高通量测序平台上。 - 运行测序,生成原始测序数据。 步骤5:质量控制和数据预处理 - 对原始测序数据进行质量控制,包括去除低质量读取和去除接头序列。 - 使用软件(如FastQC)评估数据质量,并根据需要进行修剪或过滤。 步骤6:基因表达分析 - 将修剪后的测序数据与参考基因比对。 - 使用软件(如HISAT2或STAR)进行比对,并生成比对文件(如BAM格式)。 - 使用软件(如HTSeq或featureCounts)计算基因的表达值。 步骤7:差异表达分析 - 使用统计学方法(如DESeq2或edgeR)来识别在处理和对照之间差异表达的基因。 - 设置合适的阈值来确定差异表达基因。 - 对差异表达基因进行进一步的功能注释和通路分析。 步骤8:结果解释和验证 - 从差异表达基因列表中选择感兴趣的基因进行验证。 - 使用定量PCR、免疫印迹等技术验证RNA-seq结果。 这只是一个 bulk RNA-seq 教程的概述,每个步骤都还有很多具体细节和方法可以选择。希望这对您有所帮助!如果您有任何进一步的问题,请随时提问。
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