定量检测是什么_【分子】荧光定量PCR（二）

一、实时荧光定量PCR概述

1.实时荧光定量PCR的概念

实时荧光定量PCR是指，使用荧光探针标记PCR产物，利用荧光信号积累从而对PCR反应进行实时监测的过程。以反应时间内DNA的增量为基础，能够对DNA进行定量分析。荧光定量PCR简称：RT-qPCR（注意不是反转录PCR（RT-PCR））。

2.相对定量与绝对定量

(1) 相对定量相对定量是指，测定目的基因在两个或多个样本中相对内参基因的表达水平，不需要知道其在每个样本中的拷贝数。可用未处理样品或某一时间样品作参照，无需做标准曲线。

(2) 绝对定量绝对定量是指，测定目的基因在样品中的拷贝数。必须使用已知拷贝数的标品，必须做标准曲线。

3.实时荧光定量PCR的化学基础

(1) SYBR Green I染色法：信号强度和dsDNA浓度呈正比SYBR Green I染料能够与任何dsDNA的小沟非特异性结合，每形成一条双链，就有相应染料与之结合，产生荧光信号，因此荧光信号的积累与PCR反应过程完全同步。

优点：成本低，不必设计复杂探针，适合初步筛查。

缺点：无特异性，不能进行多基因筛查，每个反应只能检测一个目标基因，且结果易受非特异性引物或引物二聚体影响，易产生假阳性。