荧光定量PCR介绍

• 什么是qPCR

qPCR也叫Real-time Quantitativ PCR，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时监测，以此实现在对初始模板的定量分析。

• qPCR分类

根据Real-time qPCR 的化学发光原理可以分为2大类: 一类为非探针类，其中包括如SYBR@ Green I染料法等，通过染料来指示扩增产物的增加。一类为探针类，包括TaqMan探针和分子信标，利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加。

1、SYBR GreenⅠ染料法：

SYBR Green I是一种DNA结合染料，能与双链DNA小沟结合，与双链DNA结合后，其荧光大大增强，利用这一性质可对扩增产物检测。在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBRGreen荧光染料掺入DNA双链后能够吸收497nm的激发光并发出520nm的荧光，游离的SYBRGreen染料几乎没有荧光信号。

 

2、TaqMan探针法

在PCR扩增时加入一对引物的同时扩增时加入一个特异性的寡核苷酸荧光探针，该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，DNA聚合酶的5′-3’外切酶活性将探