荧光定量PCR介绍

微基生物

于 2022-05-05 16:16:44 发布

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文章标签：学习经验分享 qpcr 生物实验

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qPCR，全称Real-time Quantitative PCR，是一种实时监测PCR扩增过程的检测系统，通过荧光信号实现对初始模板的定量分析。qPCR主要分为非探针类（如SYBR Green I染料法）和探针类（如TaqMan探针法）。实验过程中，包括DNA/cDNA模板准备、标准品构建、体系配制、程序运行及结果分析等步骤。绝对定量通过标准曲线计算样本中目的基因拷贝数，相对定量则通过内参基因对比目的基因表达量变化。qPCR在生物实验中广泛用于基因表达分析和核酸定量。

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什么是qPCR

qPCR也叫Real-time Quantitativ PCR，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时监测，以此实现在对初始模板的定量分析。

qPCR分类

根据Real-time qPCR 的化学发光原理可以分为2大类: 一类为非探针类，其中包括如SYBR@ Green I染料法等，通过染料来指示扩增产物的增加。一类为探针类，包括TaqMan探针和分子信标，利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加。

1、SYBR GreenⅠ染料法：

SYBR Green I是一种DNA结合染料，能与双链DNA小沟结合，与双链DNA结合后，其荧光大大增强，利用这一性质可对扩增产物检测。在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBRGreen荧光染料掺入DNA双链后能够吸收497nm的激发光并发出520nm的荧光，游离的SYBRGreen染料几乎没有荧光信号。