常见荧光定量 PCR 检测方法比较

以参照物为标准，对 PCR 终产物进行分析或对 PC R过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量 PCR。定量 PCR 的可行性定量一般是在 PCR 扩增的指数期进行的。下面我们来看一下几种常见荧光定量 PCR 检测方法。

 

 

1SYBR Green I  检测模式

 

 

SYBR Green I 是一种能与双链 DNA 结合发光的荧光染料。其与双链 DNA 结合后， 荧光大大增强。因此， SYBR Green I  的荧光信号强度与双链 DNA 的数量相关，可以根据荧光信号检测出 PCR 体系存在的双链 DNA 数量。SYBR Green I  的最大吸收波长约为 497 nm，发射波长最大约为 520 nm。PCR 扩增程序一般为 94℃～55℃～72℃三步法，40 个循环。SYBR Green I 的缺点：由于 SYBR Green I 没有特异性，不能识别特定的双链，只要是双链就会结合发光，对 PCR 反应中的非特异性扩增或引物二聚体也会产生荧光，通常本底较高，所以在临床上使用可能会有假阳性发生。

SYBR Green I  的优点：SYBR Green I  的优点是因为其缺点产生，由于它能所有的双链 DNA 相结合，所以对不同模板不需特别定制不同的特异性探针，通用性较好，并且价格相对较低。这对科研是很有利的，因此国内外在科研中使用比较普遍。

 

 

 

2水解探针模式( Taqman 探针)

 

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