分析DNA甲基化的手段有很多,除了甲基化芯片外,还有WGBS和RRBS等实验与高通量测序相结合的手段,不管是哪种策略,都需要对DNA进行亚硫酸氢盐处理。
在WGBS
和RRBS
的分析过程中,最重要就是通过比对识别甲基化位点。原始序列由于经过了亚硫酸氢盐处理,在比对时,为了正确区分甲基化位点和SNP位点,就需要特殊的比对软件。bismark
就是甲基化测序常用的比对软件之一。
bismark
用于将亚硫酸氢盐处理的reads与参考基因组进行比对,并识别甲基化位点。该软件具有以下特点:
一个步骤同时完成比对和methylcation calling;
支持单端和双端数据
支持gapped 和 ungapped 比对
seed length 和 错配个数都是允许调整的
可以识别CpG, CHG, CHH 等甲基化位点
软件官网
https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/bismark/
软件安装
wget https://github.com/FelixKrueger/Bismark/archive/0.19.0.tar.gz
tar xzvf 0.19.0.tar.gz
cd Bismark-0.19.0/
export PATH=$PWD:$PATH
bismark
首先对基因组进行两种转换