weixin_43595061的博客

原创 细胞培养与预实验

这批细胞状态良好，SY5Y增殖速度较年前明显加快。至今已冻存3支原生态PC12和4支原生态SY5Y。昨天按40000/80000cells/孔的密度在96孔板上接种了SY5Y，以15Hz的频率，分别以30%和15%的强度刺激4或6天，做个预实验。摸索何种刺激强度和刺激时间、接种密度等对结果的影响。明天上午PC12可冻存传代，导师建议做一下PC12的实验。因此明天冻村后考虑接种一批PC12做增殖...

原创 SY5Y与实验--小组会

原创 双标免疫荧光技术操作要点

一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。5、荧光抗...

原创 荧光免疫染色之抗体的选择

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求荧光二抗1【一抗的种属来源】　　二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗...

原创 缓冲液的配制（PBS与PBST）

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法0.01M PBSPBS 135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2 PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24...

原创 免疫荧光二之技术详解

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、...

转载 神经元树突、早期、突触及神经元标志物

1、神经元树突标志物：微管相关蛋白Microtubule-associated protein-2(MAP-2)：Neuron Dendrite-specific MAP; protein found specifically in dendritic branching of neuron 是组成神经元细胞骨架的重要组成成分，包括：MAP5、MAP1.2和MAP1三种不同类型。在神经系统发育、形...

原创 免疫荧光染色

细胞免疫荧光染色（培养板中染色）1．固定：培养的细胞，弃去培养基，冷的PBS洗两次，首先用4%多聚甲醛（4孔板200μl）固定10min，PBS洗2次，每次5－10分钟。2．在含0.1% Triton X-100（4孔板200μl）的PBS中进行10min的透膜处理，PBS洗2次，每次5-10分钟。手动轻轻晃动数次，吸尽液体。3．羊血清用PBS配制成4％羊血清封闭液，室温封闭（4孔板200μ...

原创 免疫荧光染色一抗多克隆抗体与单克隆抗体的区别

单克隆抗体和多克隆抗体有很多区别首先*1.制备上的区别经过特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞，经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株，最后进行细胞培养或将细胞注入到动物（一般为balb/c小鼠）腹腔中用腹水培养，收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐，只需将抗原（纯度越高越好）直接注入到动物体内进行免...

原创 SY5Y诱导分化为成熟人神经元的方法及检测物质总结

原创 新订购的SY5Y与PC12与实验

寒假期间贮存细胞的液氮罐液氮挥发告罄，所有保存的种子全部over。损失惨重，这是一次血的教训，已排查出原因。因此，原计划的实验，日期被拖推迟。2.15返校至今，多在阅读文献，设计实验。2.23在国家细胞资源共享服务平台从北京分部订购了PC12、SY5Y两支细胞，分别于3.15和3.16收货。这是个惊喜，根据细胞中心的回复，应在下旬到货。将细胞中心的完全培养基吸出，留少许供细胞生长使用。前期扩增留种...

原创 桃花节开幕与国家重点实验室开放日

学校起源于北洋工艺学堂，我所在的东院留有三栋老建筑：南大楼、北大楼和团城。与北运河一堤之隔，这堤便是桃花堤。桃花堤长约1.5km，背学堂面北运河，地理位置绝佳。每逢公历，3月桃花始开，中旬最盛，此时便是桃花节开幕之日。此次桃花节的一大亮点是省部共建电工装备可靠性与智能化国家重点实验室开放。桃花节开幕当天，为国家重点实验室开放日游客可以进入实验室参观。这不仅有利于向民众展示我校的科研进展与风貌，更有...

原创 Sci期刊查询--总体篇幅、测量参数的量等

Regulation of osteoclast differentiation by staticmagnetic fields（正文12页半，discussion 1.5-2页、参考文献40篇Received 24 June 2015 Accepted 4 January 2016）我们推测，对成骨细胞分化具有正(16t)或负(500nt和0.2 T)作用的强度将对破骨细胞分化产生负向...

原创 神经机制、神经网络、深度学习与人工智能

高我一级的一位师兄，在有C语言的基础上，自学了一年深度学习和pathon等知识后，被好未来脑科学实验室聘用，待遇优厚。随着国家脑科学计划的出台，我国关于脑功能和神经调控的研究如雨后春笋般快速发力。目前该领域的研究多集中于脑功能检测、神经元机制、伸进调节、精准医疗、神经环路和神经网络等方面。我的研究方向中包括磁神经调节，探究磁场调节神经元活动的机制。深度学习中有学习一词，就动物而言，学习与脑和神经有...

原创 神经科学体外模型:SH-SY5Y细胞分化为具有成熟神经元形态和生化特征的细胞

（2区 林雪平大学 300左右）摘要：我们的目标是开发一个改进的体外模型，产生具有人类成熟神经元形态和生物化学的可持续细胞。为了获得具有神经分化和功能的细胞，我们研究了细胞外基质(ECM)凝胶中SH-SY5Y细胞的三维培养与报道的几种具有神经分化作用的因素相结合的效果。这导致细胞具有明显的神经元形态与长，广泛分支的神经元突起。进一步的研究揭示了包括突触蛋白Sv2和核标记物NeuN在内的几种神经特...

原创 对不同诱导剂诱导分化的SY5Y特异性神经物质表达的总结

注： *蛋白印迹 #荧光染色 &生化分析 √显著上升 --不显著

原创 最终分化的SH-SY5Y细胞为研究多巴胺激动剂的神经保护作用提供了一个模型系统

Terminally Differentiated SH-SY5Y Cells Provide a Model System for Studying Neuroprotective Effects of Dopamine Agonists（2004年 3区，亚利桑那州立大学 78）摘要：我们对SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞系的未分化(UN)和三种分化条件（RA、TPA、TPA联合RA）诱导分...

原创 分化成功的标志及特异性神经递质的检测

于SY5Y分化过程中施加rTMS，当其分化成功后，检测动作电位（active potential， AP）。检测AP前存在一个关键的问题----SY5Y 分化成功的鉴定。近期读的文章，多是关于agent诱导SY5Y分化的。我着重关注了诱导分化的具体步骤和检测的物质。就目前接触到的文章而言，提到的成熟神经元的标志物包括但不局限于：生长相关蛋白（growth-associated protein ，...

原创 二维码的产生及生成

对条形码最初的印象是在香烟盒子上，等长却宽窄各异的黑色条块。在超市买东西时，才注意到扫描条形码可以获得商品的信息。大约从15年，二维码横空出世，在极短的时间里，便如日中天。如今，已经占领了大街小巷和各种行业领域。条形码(barcode)是将宽度不等的多个黑条和空白，按照一定的 编码规则排列，用以表达一组信息的图形 标识符。常见的条形码是由反射率相差很大的黑条（简称条）和白条（简称空）排成的 平行...

原创 Effects of all-trans-retinoic acid on human SH-SY5Y neuroblastoma as in vitro model in neurotoxicity

（NeuroToxicology 3区，港大 25）1.简介 SY5Y是一种多巴胺能神经元细胞系。RA的分化表现为神经突广泛生长，神经元细胞核、神经元特异性烯醇化酶、突触球蛋白、突触相关蛋白-97表达增加，分化抑制剂-1表达减少。细胞培养：接种后48小时内，10%热灭活牛血清的培养基培养。之后换3%热灭活血清，10μMRA培养起七天。做蛋白印迹时，按2105cells/孔的密度接种到6孔板中。...

原创 Phenotypic Characterization of Retinoic Acid Differentiated（实验处理和结果）····

（PLOS one 3区 荷兰神经科学研究所）蛋白印迹分析：将细胞接种在24孔板里，第八天，细胞在70ml RIPA (25 mM Tris-HCl pH 7.4 (Sigma), 150 mM NaCl (Sigma), 1% NP40 (AppliChemicals), 1% sodium deoxycholate (Sigma), 0.1% SDS and 16Complete Prote...

原创 2019中国脑科学与神经调控技术发展高峰论坛

随导师于3月1号抵达武汉，2-3号两天的会议。此次会议以携手奋进、共创新时代为主题，围绕脑科学与神经调控技术展开。在我国一体两翼，以研究神经认知原理为主题，两翼研发重大疾病诊疗技术和类人脑智能的中国脑功能计划的大背景下，探究电磁刺激调控神经精神疾病的技术。参加此次论坛的部分学者曾在2018中国首届脑功能神经调控与检测论坛上做过报告。意识到这一点之后，我便有心留意他们此次报告中的新进展。将记录到...