超分辨显微成像技术

超分辨显微成像技术

阿贝极限公式：
$$d=\frac{\lambda }{2nsin\theta }$$
d：两个艾里斑的最小距离
$\lambda$：光的波段
n:成像的介质，一般空气取1
$\theta$：孔径半角，最大90°
定义光学显微镜分辨率极限为200nm
光形成的两个艾里斑，如果距离过近则无法分辨，艾里斑大小和光的波长成正比，可见光波长为400-800纳米，光学显微镜分辨率大约为所用光波长的一半，即分辨率最高为200nm

如何继续提高显微能力？

电子显微镜——电子波长为光波长的千分之一，因此电子显微镜的分辨率是光学显微镜的1000倍，但是电镜需要在成像物体上覆上一层金属膜，如果这样观察活细胞会立刻杀死细胞，一次无法对活细胞进行成像。

荧光显微镜——特制荧光染料与细胞器结合，染色标记后打一束激发光，就会产生绿色荧光。

• PALM(光活化定位显微术)
• STORM(随机光学重构显微术)
  不同时间轴上逐一点亮每个荧光分子，并逐一定位中心进行超分辨
• STED(受激发射损耗显微术)
  将光斑变小，先打激活光，再打灭活光，从而使光斑变小
• SIM技术
  当今唯一能够对活细胞进行长时观测的荧光超分辨技术
  如今最好的成像技术可以达到1nm左右
  面临问题及解决方案：
• 随着荧光成像技术不断跟进。能够实现对细胞核结构和细胞质结构进行局部成像，丢失大量组织生物微观信息
• FLSR荧光超分辨成像技术
  * 类组织器官：形成三维的细胞环境，对药物等靶向治疗提供体外检测过程

常见生物样品制备：

• 细胞荧光染色
• 类细胞培养