Nature|频率扫描系统中的时变奇偶时间对称性

自从大约100年前首次被描述以来，神经退行性疾病一直被定义为大脑中异常折叠的蛋白质丝的聚集。之前对这些细丝的结构研究表明了一个共同的主题：细丝是由单一类型的蛋白质（如tau、α-突触核蛋白或淀粉样β蛋白）有序组装而成的。Arseni及其同事在《自然》杂志上发表文章1，首次观察到由两种不同蛋白质组成的疾病相关细丝——TAR DNA结合蛋白43（TDP-43）和膜联蛋白A11（ANXA11）。使用一种称为冷冻电子显微镜（cryo-EM）的技术，作者展示了这两种蛋白质的片段如何相互作用组装成螺旋丝，为这些致病实体的机制起源提供了线索。

一系列神经退行性疾病，统称为带有TDP-43内含物的额颞叶变性（FTLD-TDP），以TDP-43蛋白的聚集为特征。FTLD-TDP至少有四种类型（A-D型），其特征是TDP-43聚集体在大脑中的分布和形状。之前的研究2,3揭示了A型和B型TDP-43细丝的结构。有趣的是，尽管TDP-43在两种疾病类型中都形成了原纤维，但每种类型的细丝都有不同的重复结构褶皱。其他与神经退行性疾病相关的蛋白质，如tau4，也可以在疾病中产生不同的丝状组装，这表明上游生物现象可能决定了易聚集蛋白质的结构亚型。

在本研究中，作者研究了FTLD-TDP C型中发现的细丝结构，这是一种遗传、临床和病理上不同的类型。与A、B或D不同，没有特定的基因突变与C型有关。临床上，C型患者通常会出现一种特定形式的语言功能障碍，这在A、B、D型患者中并不常见。TDP-43聚集体在C型患者大脑中的细胞分布也是独特的。在A、B和D型中，TDP-43聚集体在神经元细胞体内形成。然而，在C型中，线状TDP-43聚集体出现在轴突和树突中，树突是促进神经元之间交流的细长细胞延伸。

首先，Arseni及其同事从患有FTLD-TDP C型的人的脑组织中提取了TDP-43细丝。然后，他们捕获了数十万条细丝的冷冻电镜图像，以生成3D重建。所得结构形成了风筝形横截面和左旋螺旋扭曲（图1），与FTLD-TDP a型和B型不同。在所有四个受试个体的样本中都发现了这种形状，将其确立为典型的C型褶皱。

图1|杂合蛋白丝。TDP-43蛋白丝是神经退行性疾病额颞叶变性的标志，伴有TDP-43内含物（FTLD-TDP）。Arseni等人1解析了FTLD-TDP C型中TDP-43细丝的结构，并发现令人惊讶的是，第二种蛋白质ANXA11与TDP-43交织在一起。a、 在神经元中，TDP-43和ANXA11一起穿过细胞，并可能通过称为RNA颗粒的无膜冷凝物和称为溶酶体的膜结合细胞器之间的界面上的低复杂性结构域相互作用。ANXA11使RNA分子能够在溶酶体上“搭便车”，因为它们沿着神经元突起（轴突和树突）向下移动，以便在远离神经元细胞体的情况下进行蛋白质合成。b、 在FTLD-TDP C型中，TDP-43和ANXA11的片段（仅低复杂性结构域）相互作用并形成丝状组件，在轴突和树突中表现为线状聚集体。在正常情况下，这些蛋白质之间的密切关联可以解释它们在疾病中共同聚集的倾向。

令人惊讶的是，作者发现两条离散但交织的蛋白质链组成了细丝。通过解析冷冻EM重建的氨基酸侧链，他们发现其中只有一条链与TDP-43的蛋白质序列相匹配。在搜索了人类蛋白质组（完整的人类蛋白质组）以寻找第二条链的身份后，作者找到了一个成功的答案。ANXA11是一种钙依赖性膜结合蛋白，形成了与TDP-43链紧密相互作用的第二条链。埋在细丝核心的疏水界面将这两条链连接在一起。

这些杂合细丝的存在代表了TDP-43作为神经退行性变的孤立因子的传统观点的重大转变。这些发现还提出了许多关于额颞叶痴呆发生的分子过程和相关纤维形成起源的有趣问题。

TDP-43和ANXA11都是称为RNA颗粒的细胞结构的组成部分，它们动态组装以调节RNA代谢、运输和翻译5。TDP-43通过两个RNA结合基序直接与RNA结合，从而能够直接调节RNA代谢。ANXA11可以同时与RNA颗粒和称为溶酶体的膜结合细胞器相互作用，通过“溶酶体搭便车”机制促进RNA在轴突和树突中的运输6。这种现象使局部蛋白质合成成为可能，这对轴突修复和记忆形成等过程至关重要7,8。

这两种蛋白质的关键物理特征可能是它们共聚集倾向的基础。形成杂化原纤维的TDP-43和ANXA11片段由低复杂性结构域组成，这些结构域经历液-液相分离，这一过程类似于油与水的分离。有趣的是，TDP-43和ANXA11在轴突中的溶酶体上一起旅行6。它们还共同定位在称为应力颗粒的细胞结构中，应力颗粒是细胞扰动后形成的蛋白质和RNA的缩合物。ANXA11的低复杂度域对于驱动ANXA11和TDP-43在应力颗粒中的共定位是必要和充分的。由于FTLD-TDP C型中杂交TDP-43-ANXA11丝的独特线状聚集主要发生在轴突和树突中，因此TDP-43和ANXA11在RNA运输过程中的生理相互作用可能是它们在疾病中最终共聚集的基础9（图1）。过去五年的工作探索了涉及彼此不同的蛋白质的相分离的动力学和决定因素10,11。这些研究对于理解FTLD-TDP C型是如何发展的可能特别重要。

尽管有这些显著的观察结果，但这项研究仍有重要的局限性。为了排除组织提取引起的伪影，作者用针对TDP-43和ANXA11的抗体标记了完整的C型脑组织，并使用荧光显微镜观察了这些蛋白质的位置。与他们的初步发现一致，作者发现所有聚集体都显示出TDP-43和ANXA11的标记。今年早些时候，另一个研究小组在来自FTLD-TDP C12型个体的大量尸检脑组织中报告了类似的发现。尽管这些蛋白质在显微镜下的共定位表明杂交丝可能发生在体内，但不能排除体外结构研究所需的丝制备引起的伪影。未来需要使用先进技术进行结构研究，例如用于表征阿尔茨海默病患者死后脑组织中淀粉样蛋白β和tau亚细胞定位的技术，以验证TDP-43和ANXA11混合丝在原位的存在和定位。

最后，作者观察到蛋白质丝的分子量远大于基于结构的预测。由于冷冻EM通常仅在解析重复结构方面准确，这表明细丝可能被额外的ANXA11和TDP-43氨基酸残基的“模糊涂层”包围。需要进一步的研究来解决这些残留物是什么，以及它们如何影响构成光学显微镜下可见的较大聚集体的相邻细丝之间的关系。

展望未来，单个杂交原纤维的发现应促使人们在神经退行性疾病的各个领域寻找更多的杂交原纤维，从已知与TDP-43共聚集的蛋白质开始，如RNA结合蛋白ataxin-2和hnRNPA2。在运动神经元病（肌萎缩侧索硬化症）、包涵体肌炎和边缘性年龄相关性TDP-43脑病（称为LATE）等相关疾病中，TDP-43聚集体中是否存在杂合纤维？在FTLD-TDP C型以外的疾病中，ANXA11聚集体的纤维结构是什么，例如与家族性ALS或由编码ANXA11的基因突变引起的额颞叶痴呆相关的疾病（参考文献13）13？

最后，C型细丝的杂交性质表明，ANXA11可以影响TDP-43原纤维的形成和稳定性，改变疾病的进展和严重程度。靶向TDP-43和ANXA11之间的相互作用——假设这可以在不破坏潜在关键生理相互作用的情况下完成——可能为神经退行性疾病提供新的治疗途径。