文库的构建及测序(未完待续)

提取样品总 RNA后，用带有Oligo（dT）的磁珠富集真核生物 mRNA（若为原核生物，则用试剂盒去除 rRNA后进入下一步）。加入 fragmentation buffer将mRNA打断成短片段，以mRNA为模板，用六碱基随机引物（random hexamers）合成第一条cDNA链，然后加入缓冲液、dNTPs、RNase H 和DNA polymerase I合成第二条cDNA链，在经过 QiaQuick PCR 试剂盒纯化并加 EB缓冲液洗脱之后做末端修复、加poly（A）并连接测序接头，然后用琼脂糖凝胶电泳进行片段大小选择，最后进行PCR 扩增，建好的测序文库 （200 bp） 用Illumina HiSeq™ 2000进行测序。