星状纳米金IgG-Au-HRP-p53标记盐酸克伦特罗单克隆抗体/兔抗的制备过程
纳米金(Nanogold)是指金粒子直径在1~100 nm之间的金材体,今天小编分享星状纳米金IgG-Au-HRP-p53标记抗体,一起看看吧:
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纳米金标记P53制备过程:
取浓度为0.59× 107 mol/L的10 nm 纳米金溶液1 ml,加入0.2 mol/L的K,CO;调至 pH 为9.0左右;加入HRP与抗体体积比为10:1,浓度均为l mg/ml 的混合液66 ul,室温孵育1 h;加入10%( w/v)聚乙二醇(PEG)8 000 50 ul稳定和钝化胶体金;后纳米金探针用纳米金重悬液(0.05 mol/L TrispH 7.8,含1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05% PEG,0.05%PVP,0.15% Tween20)在离心半径为9 cm,9 000 r/min、4 ℃条件下,离心4~5 次,除去未结合的抗体和 HRP,加入400 ul 纳米金重悬液重悬纳米金探针,4 ℃放置备用。
纳米金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体制备过程:
移取纳米金溶液0.5 ml.于5 ml.离心管中,用0. 1 mol-L-'氢氧化钠溶液调节至适当的酸度,用黑纸包住避光。在避光条件下,缓慢搅拌.先缓慢滴加适量抗体,搅拌反应l h,再缓慢滴加牛血清白蛋白(BSA)至其质量浓度为5 g . L-',搅拌反应0.5 h,后缓慢滴加聚乙二醇至其质量浓度为l g ·L-',搅拌反应0.5 h。反应后溶液于4℃放置过夜。以12 000 r . min~'转速离心45 min。将制得的金标抗体采用离心法纯化,弃去上层溶液,沉淀重溶于酸度为pH 7且含5 g·L-' BSA和1 g·I聚乙二醇的溶液中,于4℃保存,备用。
生物的蛋白、多肽、核苷酸的结构会受到系统的温度的影响,在1定的温度下,多肽或核苷酸的分子结构会发生变化,导致蛋白的功能损失和核苷酸的分解。因此,可以利用纳米颗粒对温度的敏感分子进行改性,从而适应对温度变化的反应。而纳米金是一种常用的纳米颗粒,可以对纳米金表面修饰,用疏基、胺基等配体可以修饰金纳米粒子,借助配体的官能团参与多种化学反应等。
HRSW RL2023.1