ITRAQ、TMT标记定量蛋白质组研究

1、实验介绍

同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ）技术由AB SCIEX公司研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。

2、实验步骤:

2.1样品准备:将待测样品进行定量计算出样品蛋白浓度;

2.2蛋白还原烷基化及酶解:每组样品各取100μg按照iTRAQ试剂盒要求进行处理，使用测序级胰蛋白酶溶液酶解后,超滤管离心收集酶解肽段;

2.3 iTRAQ标记:将ITRAQ试剂平衡到室温,用150μL异丙醇溶解，取酶解肽段加入iTRAQ试剂后室温反应2 h,加入水终止反应，等量混合不同组样品，真空冷冻干燥样品: .

2.4 LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrap进行串联质谱鉴定。

2.5数据处理及生信分析

3、iTRAQ、TMT技术优势：

3.1同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析；

3.2不会破坏所测定的蛋白质；

3.3适合样品类型多：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；

3.4与凝胶分离的蛋白质定量技术相比，iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子，如低丰度蛋白质、强酸（碱）性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子；高通量，可一次实验，实现多个样品的蛋白质定性定量；

3.5标记完全，标记效率高达97%以上；

3.6几乎兼容所有来源的样本；

3.7定量敏感，反应速度快，实验周期短。

4、常见样品类型

5、示例图

ITRAQ标记谱图

蛋白互作图