细胞工程-动物细胞工程-3- 动物细胞培养技术-1

一、基本概念

 

1．动物细胞培养技术(animal cell culture) ：指从用无菌方法将动物体内的细胞或组织取出，模拟体内的生理环境，在体外进行培养，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。

体外培养（in vitro culture)：分为组织培养（tissue culture）；细胞培养（cell culture）；器官培养（organ culture）。

 二、动物细胞体外培养特点（P243)

• 无细胞壁，对环境极其敏感，包括PH值、温度、剪切力；
• 动物细胞生长缓慢，培养时间长。
• 更易受微生物污染，需要防止污染问题。
• 对营养要求高，一般还需要血清。
• 绝大多数动物细胞具有贴壁依赖性生长特征；
• 长期培养易变异；

总之，动物细胞培养的要求更高，难度更大。

三、动物细胞培养的环境要求

1.恒定的温度

偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。 温度除影响细胞的生长代谢外，在大规模培养中影响重组蛋白药物的表达。

2. 气体

需要O2、CO2，氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量 和合成细胞生长所需用的各种成分；

• CO2与培养基pH密切相关。
• 气体环境常有95%空气和5% CO2构成。

3.pH

• 大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,每种细胞都有其最适pH值.
• 当pH低于6.8或高于7.6时的生长会受到影响，甚至死亡。

4.营养：要求高，需要葡萄糖、氨基酸、维生素、辅酶、 核酸、激素、生长因子、血清。

5.渗透压：260-320mmol/L。

6.无毒、无污染

四、体外培养细胞生物学特性

（一） 体外培养细胞的生物学特点

1.基本生物学特征和体内相似

2.体内外细胞的差异性

体外培养细胞有时遗传学特征改变，如形态功能改变，变成肿瘤细胞，细胞分化状态改变。

（二）培养细胞的生长方式及形态 （教材p227）

1.贴附生长一贴附型细胞：贴附于支持物表面才能生长的细胞。

一◆ 贴附含义:细胞之间相互接触;细胞与细胞外基质结合。

2.悬浮生长一悬浮型细胞：于悬浮状态下即可生长。

3.兼性贴壁生长——兼性贴壁细胞：兼具上述两种生长方式

贴壁细胞按照培养细胞的形态不同，主要分为：成纤维细胞（常见）、上皮细胞（常见）、游走细胞（不常见）、多形细胞（不常见）。

（1）成纤维细胞型（fibroblast）  

形态：呈梭形或不规则三角形生长，卵圆形细胞核位于中央，胞质向外伸出2-3个长短不同的突起。

生长特点：细胞一般并不紧靠相连；生长时呈放射状、漩涡状、火焰状走向。  

来源：由中胚层间充质组织起源的组织。如心肌细胞、平滑肌细胞、成骨细胞等。

 （2）上皮细胞型(epithelium)

形态：呈扁平不规则多角形，中央有扁圆形核。  

生长特点:细胞彼此紧密相连成单层细胞，呈现“铺路石状”。  相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状  

来源:内胚层和外胚层。如皮肤表皮细胞、消化管和呼吸道上皮细胞、血管内皮细胞等。