酵母双杂交系统是一种用于研究蛋白质间相互作用的技术，由Fields和Song创建。该系统基于真核转录调控，能够快速分析蛋白质相互作用并寻找配体。通过酵母细胞内报告基因的表达与否判断相互作用。文章讨论了其原理、设计、重要元件、应用、优势、局限性以及包括反向双杂交、酵母三杂交和核外双杂交在内的新发展。
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酵母双杂交系统
又称作蛋白陷阱捕获系统。
Fields和Song等人根据真核转录调控的特点创建的。
利用酵母双杂交系统可以
- 快速分析已知蛋白质之间的相互作用
- 寻找、分离与已知蛋白相互作用的配体
- 研究抗原和抗体相互作用
- 发现新蛋白质和发现蛋白质新功能
- 筛选药物作用位点
- 药物对蛋白相互作用的影响
- 建立基因组蛋白连锁图等方面应用广泛。
酵母双杂原理
建立是基于真核转录调控特点。
真核生物转录需要转录激活因子参与，真核生物的转录激活因子含有两个不同的结构域：DNA结合结构域（DNA binding domain，DNA-BD）和DNA转录激活结构域（Activation domain，AD），这两个结构与可以独立分开，功能互不影响。
BD和AD分别单独作用并不能激活转录反应，只有两者在空间上充分接近，才能呈现完整的转录激活因子活性，使下游基因进行转录。
酵母双杂设计
- 将两待研究的蛋白（X蛋白和Y蛋白）分别与BD、AD结构域构建融合质粒。
- 将构建好的两个融合质粒转入同一酵母细胞进行表达，
- 如果两蛋白之间不存在相互作用，则下游基因（报告基因）不会转录表达；
- 如果两蛋白之间存在相互作用，则BD与AD两结构域空间上接近，从而下游基因及逆行转录。
- 判断通过报告基因表达与否，即可判断两蛋白之间是否存在
图1：酵母双杂交原理
如何判断是否存在相互作用？
报告基因作为一种营养标记，常用的有HIS3，URA3，LacZ和ADE2等，对应的宿主菌则是相应标记的缺陷型细胞，必须要在含有该营养标记的培养基中生长。因此，当有相互作用的蛋白存在时，激活报告基因的表达，从而能够在不含营养标记的培养基中生长，以此验证是否存在相互作用。
※酵母双杂交系统重要元件※
酵母双杂交系统由三个部分组成&
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