基因表达分析技术：q-PCR、RT-PCR和qRT-PCR的比较与应用

Q-PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction，定量聚合酶链反应）：

Q-PCR是一种用于定量测定DNA或cDNA分子数量的技术，它通过实时监测PCR扩增过程中荧光信号的变化来定量分析目标序列的拷贝数。Q-PCR通常使用荧光标记的探针或染料，如SYBR Green，来检测扩增产物。该技术广泛应用于基因表达分析、病原体检测、遗传突变分析等领域。

Real-time PCR和qPCR（Quantitative Real-time PCR ）都是实时定量 PCR，指的是 PCR 过程中每个循环都有数据的实时记录，因此可以对起始模板数量进行精确的分析。测表达量和RNA有关，但是RNA不稳定，所以用cDNA作为模板，实时荧光定量PCR，它不仅可以用cDNA作为模板，也可以用基因组DNA等作为模板。

RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，逆转录聚合酶链反应）：

RT-PCR是一种将RNA逆转录成cDNA，然后通过PCR扩增的技术。它首先使用逆转录酶将RNA模板转换成cDNA，然后使用常规的PCR方法进行扩增。RT-PCR常用于检测和分析特定RNA分子的存在和表达水平，尤其是在研究基因表达时。

RT-PCR——逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录 PCR (reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应 (PCR) 的一种广泛应用的变形。RT-PCR是可以定性的，但不能进行定量检测。

qRT-PCR（Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，定量逆转录聚合酶链反应）：

qRT-PCR结合了Q-PCR和RT-PCR的特点，是一种实时监测逆转录过程中cDNA合成的技术。它不仅能够将RNA逆转录成cDNA，还能实时定量分析目标基因的表达水平。qRT-PCR使用特定的荧光标记探针或染料，通过实时监测扩增过程中的荧光信号来定量分析。

这种技术是研究基因表达变化的首选方法，因为它能够提供精确的定量数据。

real-time RT-PCR (RT-qPCR)就是结合了荧光定量技术的反转录PCR，先从RNA反转录得到cDNA (RT) ，然后再用Real-time PCR进行定量分析(qPCR)。就是利用mRNA或总RNA为模板的实时逆转录PCR技术(quantitative Real-time RT-PCR)，指的是qPCR+ RT-PCR的组合，是说将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析。

简而言之，Q-PCR用于定量DNA，RT-PCR用于从RNA开始的PCR扩增，而qRT-PCR是实时监测RNA逆转录成cDNA并进行定量分析的技术。qRT-PCR通常用于精确测量基因表达水平的变化。

补充

cDNA，即互补DNA，是通过逆转录过程由mRNA生成的DNA分子。这种分子可以是单链或双链形式，具体取决于实验的需要和应用场景。例如，在RT-PCR、3'或5' RACE等实验中，我们通常使用单链cDNA，也就是所谓的第一链cDNA。而在构建表达载体或进行qRT-PCR分析时，则可能使用双链cDNA。一般情况下，cDNA它是在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链（可以参见转录试剂盒的说明书），但是与基因组的DNA复杂序列不一样，因为cNDA来自于mRNA，因此cDNA只有外显子，因为mRNA是通过DNA转录而来，内含子序列或者绝大部分内含子序列已经被丢弃（这原理就是mRNA的剪切作用）