RNA-Seq 笔记 [2]

本文详细介绍了RNA-seq数据的质量评估过程,包括General Statistics、Sequence Quality Histograms、Per Sequence Quality Scores等模块的解读。FastQC与MultiQC报告显示部分样本在Per Sequence GC Content和Sequence Duplication Levels上存在问题,可能存在污染和重复序列。作者提到,5'端剪掉18bp,3'端质量高不需要修剪,并探讨了重复序列在单细胞数据中的合理性。最后,作者遇到了使用trimmomatic进行过滤时的挑战。
摘要由CSDN通过智能技术生成

RNA-seq:6-qc-2

#先跑一个综合的 Multiqc 报告
#将fastqc生成的多个报告整合成一个报告,方便查看所有测序数据的质量。
conda install multiqc -c https://mirrors.tuna.tsinghua.edu.cn/anaconda/cloud/bioconda
cd /home/yinwen/RNA-seq_report/
multiqc .

用我们自己的DG数据分析一下:

① General Statistics:

 在这里我们能看到各个样本的概况或基本信息

解读:

  • %Dups:Duplicate Reads Percent,重复reads的比例
  • %GC:Average %GC Content,平均GC含量百分比
  • M Seqs:Total Sequences,总测序量
  • Length:Average Sequence Length,平均序列长度
  • %Failed:Percentage of modules failed in FastQC report,报告中不合格数据的百分比

点击左侧的 Configure Columns 可以自定义展示列参数

② Sequence Counts

该部分对每个样本序列进行了计数,横坐标为总的reads数(和General Stats中的M seqs一致),纵坐标为不同样本。蓝色和黑色下方有标记。

③ Sequence Quality Histograms

此部分为reads中每个位置(从0到150bp)的平均质量值,横坐标为位置。X轴并不是均匀的;纵坐标为质量分数,计算公式为

所以当质量分数为40的时候,p就是0.0001。

图中绿色表示合格(通过),黄色代表(警告红色则代表失败(不合格</

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