FITC-β-肌动蛋白；FITC荧光素标记的肌动蛋白

FITC（荧光素异硫氰酸酯）标记的肌动蛋白（actin）是用于研究细胞骨架和肌动蛋白动态的重要工具。通过将FITC与肌动蛋白结合，可以在荧光显微镜下观察肌动蛋白的分布和行为，帮助研究细胞运动、形状变化、细胞分裂等过程。

组成与特性

1. 肌动蛋白（Actin）:

   • 肌动蛋白是细胞骨架的关键组成部分，广泛存在于真核细胞中。
   • 具有G-肌动蛋白（球状肌动蛋白，globular actin）和F-肌动蛋白（纤维状肌动蛋白，filamentous actin）两种形式。
   • 在细胞内，肌动蛋白可以通过聚合和解聚形成动态的肌动蛋白丝，参与细胞运动、分裂和形态调节。

2. 异硫氰酸荧光素（FITC）:

   • FITC是一种绿色荧光染料，激发波长为488 nm，发射波长约为520 nm。
   • 其异硫氰酸基团能够与蛋白质上的氨基反应，形成稳定的共价键，使肌动蛋白具备荧光特性。

制备过程

制备FITC标记的肌动蛋白通常包括以下步骤：

1. 肌动蛋白的溶解与纯化:

   • 将肌动蛋白溶解在缓冲液中，如Tris-HCl缓冲液（pH 8.0），浓度一般在1-5 mg/mL。
   • 为了确保肌动蛋白的纯度，通常需要通过超速离心进行沉淀和去除杂质。

2. FITC标记:

   • 将FITC溶解在无水DMSO或DMF中（浓度1 mg/mL）。
   • 在避光条件下，将FITC溶液缓慢加入肌动蛋白溶液中，通常按照1:10至1:20的摩尔比（FITC:肌动蛋白）进行反应。
   • 在4°C下避光孵育1-2小时，确保FITC的异硫氰酸基团与肌动蛋白上的氨基共价结合。

3. 纯化标记产物:

   • 通过透析或凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）去除未结合的FITC，得到纯化的FITC标记肌动蛋白。
   • 使用紫外-可见光光谱测定FITC标记率，并确保其适合后续实验。

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QY小编zyl分享2024.10.8