原文地址:
STED和STORM、PALM
作者:
pengnei
http://www.china-stvc.org/article/show/860.aspx
微成像的非侵入性、可穿透性以及对样品无损伤等优点,当今生命科学中的显微成像研究大约80%仍然使用光学显微镜。但是由于光学衍射的限制,传统光学显微镜只能达到波长量级的空间分辨率(一般在200nm-500nm),限制了它在纳米尺度对生物分子结构和功能进行研究中的应用。
受激辐射耗尽(Stimulated emission depletion-STED)显微镜通过使用一束STED光束形成空壳形状焦斑,将衍射光斑周围的荧光分子转换为非辐射态,实现了好于50纳米的空间分辨率。由于使用全光设置,图像采集时间大致与普通共聚焦显微镜相同,对样品准备没有特殊要求,因此可以实现活细胞内生物分子的实时成像和动态跟踪。STED显微镜要求激发和STED两束光,STED波长位于荧光标记发射波长的红限,并且要求STED光束比激发光束延迟几个皮秒,以便及时将激发光激发的荧光分子退激发,所以STED显微镜的困难在于STED光束波长的选择以及两列脉冲的同步调节,技术难度较大,设备花费也非常昂贵。
近几年各国研究人员提出了几种突破衍射极限的方法。其中光活化定位显微镜(Photoactivat