骚操作：NanoDrop测蛋白浓度

​大家好，最近实验室的BCA仪器坏了，偶然发现nanodrop也可以测蛋白浓度，省不少时间！本方法原理是：紫外吸收  

友情提示：由于表格的存在，用电脑看本推文，效果更好

紫外吸收法

较为灵敏50～100mg

快速 5～10分钟

蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收

各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸

用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正

1. 选择A280波长,测蛋白浓度

2. 准备工作区域，确保工作台面干净，并清洁使用的移液器和试管。

3. 使用纯水或缓冲液，而不是待测的蛋白质样品，进行blank校准。将一小量纯水或缓冲液（与待测样品相同的体积）放置到NanoDrop测量盖片上。

4. 使用无菌纸巾轻轻擦拭测量盖片以去除表面的杂质。

5. 将测量盖片放置到NanoDrop仪器的测量槽中，并关闭仪器盖子。

6. 在仪器软件中选择蛋白质浓度的测量模式。

7. 点击测量按钮开始进行blank校准，并等待一段时间直到校准完成。

8. 校准完成后，移除blank样品并清洁测量盖片。

9. 取一小量待测的蛋白质样品（通常约为1-2微升）并将其转移到新的NanoDrop测量盖片上。

10. 使用无菌纸巾轻轻擦拭测量盖片以去除表面的杂质。

11. 将测量盖片放置到NanoDrop仪器的测量槽中，并关闭仪器盖子。

12. 点击测量按钮开始测量，并等待一段时间直到测量完成。

13. 读取测量结果，包括吸光度值和蛋白质浓度。通常，吸光度值在280纳米波长处进行测量，该波长对应着蛋白质的最大吸收峰。

如果想更准确一些，可以加上自己的标品，测一遍标品的浓度，制作标曲。

附：

五种蛋白质测定方法比较如下：

方法	灵敏度	时间	原理	干扰物质	说明
凯氏定氮法（Kjedahl法）	灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％	费时 8～10小时	将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）	用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）	灵敏度低1～20mg	中速 20~30分钟	多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物	硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸	用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似；BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰
紫外吸收法	较为灵敏50～100mg	快速 5～10分钟	蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收	各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸	用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正
Folin－酚试剂法（Lowry法）	灵敏度高～5mg	慢速 40～60分钟	双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原	硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇	耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法)	灵敏度最高1～5mg	快速5～15分钟	考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm	强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS	最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化