数据拆分_Sequel II Isoseq数据拆分测评速递~

此前，安诺基因公布了PacBio Sequel II 平台的多批测试数据，Iso-seq及CLR文库的单张SMRT®Cell产出均有不俗表现。随着Sequel II 平台测序通量的大幅提升，混样测序的需求也接踵而至。近日安诺基因对两批Iso-seq加barcode数据进行了上机测试，数据拆分比例均超过80%，各样品的数据量产出也较为均匀。详细结果请各位看官移目下方数据展示~

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Iso-seq加barcode混样测试一

样品来源：人源total RNA样品；

测序策略：8个样品分别反转录加不同barcode建库，文库等量混合上机；

测序平台：1张Sequel II 8M SMRT cell ；

测试结果：下机数据共获得653万条polymerase reads，平均酶读长为57 kb，总数据量为370 Gb，去除接头后，subreads总数据量363 Gb。 进一步使用Lima软件对测试数据进行拆分，8个样品共计获得总数据为294 Gb，拆分比例为81%，获得总的CCS reads 364万条。从每个样品的拆分来看，单个样品获得的reads数目有一定的不均一，但处在正常波动范围，数据量最小的样品也能满足subreads＞24 Gb，CCS reads数目超过35万条。

拆分前数据统计表

拆分后数据统计表

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Iso-seq加barcode混样测试二

样品来源：人、动物、植物来源的total RNA样品；

测序策略：8个样品分别反转录加不同barcode建库，文库等量混合上机；

测序平台：1张Sequel II 8M SMRT cell ；

测试结果：下机数据共获得528万条polymerase reads，平均酶读长为51 kb，总数据量为269 Gb，去除接头后，subreads总数据量261 Gb。 进一步使用Lima软件对测试数据进行拆分，8个样品获得总数据217 Gb，拆分比例为83%，获得总的CCS reads 262万条。从每个样品的拆分来看，单个样品的拆分均一性较上一次有显著提升，数据均一性很好。

拆分前数据统计表

拆分后数据统计表

整体测试评价：

1. Sequel II 平台Iso-seq测序单张SMRT cell 产出超过预期250 Gb，平均获得的polymerase reads数目在500-600万条左右，ZMW小孔利用率达到60%以上；

2. 单张SMRT cell同时混8个样品数据有效拆分比例高达80%以上，符合预期70-80%的标准；

3. 不同样本混样由于定量准确性和文库插入片段的大小分布不一，会造成各样本的数据拆分不均一，但整体浮动不大；

4. 不同的物种、不同样本类型，应根据研究目的选择合适的数据量，目前来看1张Sequel II SMRT cell的产出的reads数目，足够满足绝大多数研究需求。

数据量推荐

注：以上数据均来自已发表文章，使用PacBio RSII 或Sequel 平台。根据文章中的测序reads数换算成Sequel及Sequel II平台的相应数据量。

目前安诺基因在Iso-seq加barcode混样测序方面已搭建出稳定运行的拆分流程，在拆分速度、拆分比率等方面均有良好表现。此外，多批下机数据显示安诺基因的Sequel II平台运行稳定，高水平的产出和质量可以满足不同的科研需求，助力科研工作的开展，欢迎各位老师们前来咨询、送样~

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文案：三代产品经理 王思竞