文章信息
题目:Group IIc WRKY transcription factors regulate cotton resistance to Fusarium oxysporum by promoting GhMKK2-mediated flavonoid biosynthesis
刊名:New Phytologist
作者:Lijun Wang,Chen Wang,Xingqi Guo et al.
单位:Shandong Agricultural University
日期:21 June 2022
01
摘要
WRKY 转录因子 (TFs) 是应对病原体感染的关键调节因子。Vasinfectum ( Fov ) 是棉花最具破坏性的病原体,然而,WRKY TFs 对尖孢镰刀菌的调控机制,目前尚不清楚。
在这里,转录组测序表明 IIc 组 WRKY TF 亚家族是响应Fov的最重要的 TF 亚家族。功能获得和功能丧失实验表明,IIc 组 WRKY TF 正向调节棉花对Fov的抗性。一系列染色质免疫沉淀测序、酵母单杂交试验和电泳迁移率变化试验表明,IIc 组的 WRKY TFs 直接与GhMKK2的启动子结合并调节其表达。
重要的是,鉴定了一种由 GhMKK2、GhNTF6 和 GhMYC2 组成的新型丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联反应。功能分析表明,IIc 组 WRKY TFs 通过上调 GhMYC2 介导的几个类黄酮生物合成相关基因的表达,诱导 GhMKK2-GhNTF6 通路增加对Fov的抗性,从而导致类黄酮积累。
总之,我们的研究证明了一种新的疾病防御机制,WRKY-MAPK 通路通过该机制促进类黄酮生物合成以防御病原体感染。该途径提高了我们对植物免疫中 WRKY TF 和 MAPK 级联反应模式以及植物类黄酮在病原体防御中的重要作用的理解。
02
技术路线
1、cotton (G. hirsutum L. cv. Lumian 22)
2、four-week-old plants were infected with a Fov sporesuspension (106 conidia/ml) via the root wounding method
3、Library construction, transcriptome sequencing (RNA-seq) and data analysis
4、Gene cloning, bioinformatics analysis and genetic transformation
5、RNA extraction and real-time quantitative PCR (RT–qPCR) assays
6、Agrobacterium-mediated VIGS
7、ChIP-sequencing (ChIP-seq)
8、Yeast one-hybrid (Y1H) assays
9、Luciferase (LUC) reporter system assays
10、Yeast two-hybrid (Y2H) assays
11、Determination of the flavonoids content
03
主要结果
3.1 转录组分析确定IIc WRKY TFs是参与棉花对Fov抗性的最重要的TFs之一
Fov是棉花种植中最具威胁性的病原体之一。进行转录组测序以鉴定Fov感染后棉花中差异表达的基因,并阐明棉花对Fov抗性的分子机制。结果显示52818个基因,其中7385个上调,8480个下调(表达变化>2倍,Padj<0.05)(图1a和表S3)。然后,对上调基因进行基于GO的富集分析(图1b和表S4)。对于生物过程,大多数上调基因被分配到防御反应(GO:0006952)和生物刺激反应(GO:0009607)(图1b)。在分子功能类别中,与碳水化合物(GO:0030246)和酰基辅酶A脱氢酶活性(GO:0003995)相关的基因最多(图1b)。在细胞成分类别中,上调基因主要富集于过氧化物酶体(GO:0005777)和微体(GO:0042579)(图1b)。
基于这些结果,Fov入侵诱导了棉花生物过程的各种显著变化。TFs是调节基因表达的主要基因,在植物对病原体的抗性中起着重要作用。对差异表达的TF进行聚类分析,以从我们的转录组数据中获得更多见解。结果表明,WRKY TF比其他TF更显著,52个WRKY tf上调(图1c和S1a,表S5)。进一步的分析表明,大多数上调的WRKY TF被分配到了组Ⅷc WRKY TF亚家族(图1d和S1b)。我们的转录组数据表明,第一类 WRKY TF是棉花对Fov抗性的最重要的TF。
编辑切换为居中
添加图片注释,不超过 140 字(可选)
<