Frontiers in Immunology | 鲁东大学研究解析杀鱼爱德华氏菌诱发海马肠炎的组合毒力因子作用机制...

杀鱼爱德华氏菌侵染重塑膨腹海马肠道微生物和代谢：毒力因子协同作用的机制解析

Edwardsiella piscicida infection reshapes the intestinal microbiome and metabolome of big-belly seahorses: mechanistic insights of synergistic actions of virulence factors

Article，2023-5-03，Frontiers In immunology， [IF 8.786]

DOI：https://doi.org/ 10.3389/fimmu.2023.1135588 

原文链接：https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2023.1135588/full

第一作者：Zhang Lele (张乐乐)；Wang Fang (王方)

通讯作者：Wang Kai (王凯)

主要单位：

鲁东大学 (School of Agriculture, Ludong University, Yantai, China)

青岛大学附属毓璜顶医院 (Department of Pathology, the Affiliated Yantai Yuhuangding Hospital of Qingdao University, Yantai, China)

中国科学院南海海洋研究所 (Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou, China)

- 亮点 -

1.升级后的研究模型适用于评估不同海马物种中细菌病原体诱导的肠炎。

2.首次鉴定了7个关键的宿主代谢生物标志物，以表征Edwardsiella piscicida感染。

3.阐明了15个关键毒力因子在Edwardsiella piscicida致病的6个关键阶段相互协调，重塑肠道菌群及其功能通路和宿主代谢的分子机制。

- 摘要 -

解析Edwardsiella piscicida诱发细菌性肠炎的致病机制对全球水产养殖业的健康发展至关重要。本研究以膨腹海马（Hippocampus abdominalis）为研究对象，首次明确了Edwardsiella piscicida为其致死性肠炎的致病菌和病理特征。通过建模、评价体系升级和再评估发现，该模型和评价体系可以真实、有效的反映病原的致病模式。结合肠道宏基因组和代谢组数据的整合分析发现，15个关键毒力因子在E. piscicida致病的6个关键阶段相互协调，重塑肠道菌群和宿主代谢，诱发肠炎：Flagella、TypeⅣ pili和Lap通过显著提升Flagella assembly和Bacterial chemotaxis 为代表的肠道菌群功能活性（P < 0.01），促进病原运动、黏附和入侵；Legiobactin、IraAB和Hpt等毒力因子通过提升病原ABC transporters等功能通路的活性（P < 0.01），竞争宿主营养，促进自身复制；当遭遇吞噬细胞时，Capsule 1、HP-NAP和 FarAB帮助病原逃避宿主的吞噬作用；Bsa T3SS 和Dot/Icm通过提升Bacterial secretion system等功能通路的活性（P < 0.01），帮助病原在上皮和吞噬细胞内的复制和存活，并扩散至周边组织；LPS3可以激活LPS biosynthesis等功能通路（P < 0.01），促进毒素释放，杀伤宿主；整个侵染过程中，Bop、PhoP和BfmRS等可以激活病原Two component system通路等的活性，协调激活其它毒力因子，诱发深度感染。此外，Taurine、L-Proline、Uridine、L-Glutamate、Glutathione、Xanthosine和L-Malic acid 7个宿主关键代谢物在病原侵染后的显著下调（P < 0.01），可以用于表征E. piscicida侵染。本研究系统解析了E. piscicida诱发膨腹海马细菌性肠炎的发病机制，为鱼类相关疾病的机制探索和防控提供理论参考。

-引言 -

Edwardsiella是世界范围内最常见、危害最严重的一类人畜共患的细菌病原，其感染鱼类时，致死率高达90%以上。Edwarsiella piscicida 是一种新兴的、重要的鱼类肠道致病菌，造成全球水产养殖的巨大经济和生物量损失，严重威胁渔业健康发展。由于其具有与许多肠道病原体相似的毒力因子，例如细胞入侵蛋白、鞭毛、T3SS、T6SS、Two-component system、ABC transporters、QS、铁载体、皮肤毒素等,可以作为研究肠道疾病、单一或组合毒力机制作用的有吸引力的模式生物。然而目前研究大多集中于探究哺乳动物中E. piscicida单一毒力因子的作用机制，而鱼类中相关致病机制的研究严重缺乏。因此，探究E. piscicida在鱼类致病过程中毒力因子间相互配合诱发深度感染的潜在机制，不但可以增进对感染全过程致病机制的认识，也可为制定合理科学的防控策略提供理论参考。

生物体内微生物群是构成宿主抵御病原菌入侵的第一道屏障，也是宿主健康的驱动因素。作为微生物群中最重要的组成部分，肠道菌群通过与宿主免疫和代谢功能、病原毒力因子，以及抗生素耐药基因间的相互作用，构筑宿主肠道稳态，而病原入侵会破坏肠道稳态诱发疾病。目前，通过多组学联合分析，从病原-肠道菌群-宿主代谢的视角探究病原的致病机制已经在人类和小鼠的研究中相当流行。近期，已有学者开始关注并利用16S rDNA高通量测序、宏基因组或代谢组等单一组学技术探究肠道菌群、代谢物与鱼类疾病的关系，并取得了一定进展。然而多组学关联分析研究的缺乏，限制了研究人员从更大的尺度通过整体分子水平表征肠道病原对鱼类的致病效应与机制。

作为海洋生态环境的旗舰物种, 海马 (Hippocampus spp.) 的种群数量在过去十年中急剧下降。因此，全世界强烈支持建立海马水产养殖业，以提供海马的替代来源。与其他硬骨鱼类相比，其肠道缺乏肠淋巴组织 (gut-associated lymphatic tissue, GALT) 且组织结构较为简单，这使得它们极易在养殖环境下患细菌性肠炎，造成巨大经济损失。迄今海马中已发现20余种以弧菌为主的肠道病原，而且大多数能诱发肠炎，然而致病机制研究的缺乏极大限制了合理、有效防控策略的制定。近期我们率先发现E. tarda 可以诱发养殖线纹海马 (H. erectus) 的致死性肠炎，并构建了研究模型和评价体系。上述模型是否需要完善和适用于评估其他病原诱发的海马肠炎有待进一步验证。此外，我们发现E. piscicida同样可以诱发养殖膨腹海马 (H. abdominalis) 的致死性肠炎，对养殖造成巨大威胁。因此，揭示E. piscicida 诱发海马肠炎的致病机理对水产养殖业的健康发展具有重要意义。

因此，本研究将明确E. piscicida在膨腹海马中的致病特征，验证和丰富已构建的细菌性肠炎模型及评价体系；通过宏基因组测序分析，探明病原侵染对海马肠道菌群和功能的影响，挖掘重要的毒力因子；通过代谢组分析，明确病原侵染对宿主代谢的影响，并鉴别关键的代谢生物标志物；最后，通过联合分析解析E. piscicida致病整个过程中毒力因子重塑肠道菌群和宿主代谢的作用机制，丰富人们对爱德华氏菌属诱发鱼类肠炎的认识。

- 结果 -

细菌性肠炎模型的升级和E. piscicida的致病特征

Update of the bacterial enteritis model and determination of the pathogenic characteristics of E. piscicida in big-belly seahorses

如图1A所示，膨腹海马在E. piscicida胁迫后的存活率与海马的体重和病原胁迫浓度呈现一定的质量和剂量依赖关系，4.1–4.5 g注射105 cfu/mL 的膨腹海马存活率与Con组一样，为100 %，适合模型构建；其余组别的死亡开始时间和存活率与海马体重呈正相关与病原胁迫浓度负相关。重建研究模型后，观察到与细菌性肠炎相关的典型病理变化，如肠上皮明显溶解并灶性出血，绒毛萎缩，固有层与黏膜层分离，固有层和粘膜肌层的厚度明显增厚，血管扭曲充血，肌层及浆膜面可见大量炎性坏死等明显的病理特征 (图 S1)。与Con组相比，EP组 (4.1–4.5 g, 1 × 105 cfu/mL) 海马的体重和体长被显著抑制，尤其在胁迫的第9天 (P < 0.05) (图1B, C)。肠道促炎因子 (INF-1、TNF-α、IL-1β和IL-1βreceptor)、抑炎因子 (IL-10、IL-2)、抗菌肽基因 (Hepcidin、LEAP、Piscidin和LYZ)和TLR5基因均呈现先升高后降低的趋势 (图 S 2A,B)。同时紧密连接蛋白基因ZO-1表达模式与免疫基因相似 (图 S 2C)，而另外两个紧密连接蛋白基因Claudin 5和Occludin显示相反的表达模式 (图 1D,E)。呼吸频率呈先降低后恢复的趋势，第3-9天的呼吸频率显著低于Con组 (P < 0.05)，此后恢复，并保持在Con组水平 (图 1F)。由于呼吸频率和Claudin 5、Occludin基因表达能够很好的反映疾病进程，因此将其补充加入原有的DAI评价体系中，发现Con组的DAI指数没有明显变化，而EP组DAI从第1天开始逐渐升高，第5天开始显著高于对照组，第9天达到峰值 (P < 0.05)，随后至21天逐渐降低 (图 1G)。

图1 Edwardsiella piscicida侵染对膨腹海马存活率 (A) 、体重 (B) 、体长 (C) 、紧密连接蛋白基因Occludin (D)、Claudin5 (E) 呼吸频率 (F) 和DAI指数 (G) 的影响。图A中Con代表健康对照组 (2.5–3.0g, PSS)；EPs代表Edwardsiella piscicida胁迫组(2.5–3.0 g, 1 × 105 cfu/mL; 3.5–4.0 g, 1 × 105 cfu/mL; 3.5–4.0 g, 1 × 107 cfu/mL; 3.5–4.0 g, 1 × 109 cfu/mL; 4.1–4.5 g, 1 × 105 cfu/mL; and 4.1–4.5 g, 1 × 107 cfu/mL)。图B-G中Con代表健康对照组 (4.1–4.5 g, PSS)，EP代表 Edwardsiella piscicida胁迫组为 (4.1–4.5 g, 1×105 cfu/mL)。RR代表respiratory rate。DAI代表Disease activity index。*代表P<0.05，**代表P<0.01

E. piscicida侵染诱发肠道菌群失调及其生物标志物

Dysbiosis and biomarkers of intestinal microbiota during E. piscicida infection

细菌在界水平肠道微生物中占比最高 (图 2A)。如图2B所示，E9D组在细菌肠道菌群种水平的β 多样性与Con和E21D组差异极显著 (P < 0.01)，而Con和E21D组间差异不明显；α 多样性分析发现，E9D组的Shannon和Simpson指数极显著低于对照和E21D组(P < 0.01) (图 2C)，而ACE 和 Chao 两个丰富度指数在三组间没有显著差异，表明病原侵染改变了的海马肠道菌群结构，显著降低了其均匀度和多样性。 

LEfSe分析显示各组间的系统发育分布和生物标志物差异显著 (P < 0.05) (图 3A)。值得注意的是，E9D组中Edwardsiella和Edwardsiella_piscicida在已鉴定细菌中的相对丰度占比分别为70.10%和32.74%。Edwardsiella与Chlamydia、Enterobacter、Yersinia、Pantoea、Salmonella、Xenorbabdus、Klebsiella和 Arthrobacter呈显著性正相关 (P < 0.05)，而与Lactobacillus、Microbacterium、Enterococcus、Acinetobacter、Mycobacteroides、Flavobacterium和Thalassococcus呈显著性负相关 (P < 0.05) (图 3B)。

 图2 Edwardsiella piscicida侵染对海马肠道微生物群界水平组成 (A)、肠道菌群种水平结构 (B) 和多样性 (C) 的影响

图3  Edwardsiella piscicida 侵染对海马肠道菌群生物标志物 (A) 和微生物互作 (B) 的影响。A中生物标志物界定标准为 (P < 0.05，LDA > 3)；B图圆点直径代表物种丰度的多少；线条颜色代表微生物间的相关性 (P < 0.05，|r| > 0.7)，橙色代表显著正相关，绿色代表显著负相关

E. piscicida侵染对肠道菌群功能影响及其与生物标志物间的关系

Relationship between biomarkers and functions of the intestinal microbiota during E. piscicida infection

如图4所示，通过肠道菌群KEGG功能与生物标志物的相关性分析，发现E9D组中Lactobacillus、Enterococcus、Microbacterium、Acinetobacter、Mycobacteroides和Aeromonas 相对丰度显著下降 (P < 0.05) 的同时，与之呈显著正相关 (P < 0.05) 的11个功能通路的活性也显著降低(P < 0.05)；而Edwardsiella、Chlamydia、Enterobacter和Arthrobacter 的相对丰度显著上升 (P < 0.05) 的同时，与之呈极显著正相关 (P < 0.01) 的28个功能基因活性显著性增加(P < 0.05)。值得注意的是，Bacterial chemotaxis、Flagellar assembly、Lipopolysaccharide biosynthesis、Phosphotransferase system、Bacterial secretion system、Quorum sensing 、ABC transporters、Two component system (TCS) 这8个功能活性呈极显著增加 (P < 0.01)，可能在E. piscicida感染过程中起到关键作用。

图 4 Edwardsiella piscicida 侵染对海马肠道菌群功能 (A) 及其与肠道生物标志物的相关性 (B) 的影响。A图中未加粗的肠道菌群KEGG功能活性差异显著水平为P < 0.05，加粗的为P < 0.01 (下同)；色柱颜色代表KEGG一级功能分类，绿色代表Metabolism、橙色代表Cellular Process和Environmental Information Processing、黄色代表Genetic Information Processing、蓝色代表Metabolism；蓝色圆圈代表相对丰度减少，橙色代表增加。B图中> 0代表正相关、< 0代表负相关，颜色越深相关性越大。*代表P < 0.05，**代表P < 0.01

核心毒力因子及其与肠道菌群和功能的关系

Key VFs (KVFs) and their relationship with intestinal microbiota function

宏基因组分析共发现10类、181个毒力因子和478个毒力基因 (图 S6A  and 表 S6)。E9D组毒力因子的结构与Con和E21D组毒力因子差异显著 (P < 0.01) (图 S6B)， 这与肠道菌群的结果一致。与肠道菌及其群功能结果一致，E9D组毒力因子的相对丰度、丰富度、均匀度和多样性同样与Con和E21D组存在极显著差异 (P<0.01) (图 S6 C and 表 S6)。

E9D组相对丰度发生显著变化的毒力因子共10类，128个 (P < 0.05)，其中126个呈极显著变化 (P < 0.01) (图 5A)。Edwarsiella能表达上述全部10类，123个毒力因子，涵盖入侵的全部6个过程；上述毒力因子中有50个存在显著正相关性 (P < 0.05) (图 5B)，其中Flagella、Type IV pili、Lap、Bsa T3SS、Dot/Icm、FarAB、Alginate、Capsule1、Hp-NAP、Legiobactin、IraAB、Hpt、LPS3、PhoP、BfmRS和BopD 15个毒力因子相对丰度在TOP50内且节点复杂，可能是病原致病过程中发挥重要作用的关键。相对丰度TOP50的毒力因子与图 4中活性显著增加的28个肠道菌群功能呈极显著正相关 (P < 0.01)，而与活性显著降低的11个功能呈显著负相关 (P < 0.05) (图 5C)，表明病原毒力因子功能的发挥可能参与肠道菌群功能的重塑。此外，E9D组中相对丰度显著增加的AROs有6个 (P < 0.05) (图 5D)，且Edwarsiella中可以表达adeF、msbA、Ecol_EFTu_PLV、Ecol_GlpT_FOF和Hinf_PBP3_BCA 5个AROs。

图 5 Edwardsiella piscicida侵染对肠道菌群毒力因子组成和丰度 (A)、毒力因子间相关性 (B)、相对丰度TOP50毒力因子与菌群功能相关性 (C)，以及抗生素耐药因子丰度 (D) 的影响。热图中颜色代表相对毒力因子的含量，蓝色表示减少，橙色表示增加 (下同)；B图中橙色连线代表毒力因子间呈显著正相关 (P < 0.05, |r| > 0.7)，圆圈大小代表相对丰度；C图中右侧色柱为毒力因子的分类，蓝色代表Motility、Adherence、Invasion、紫色代表Effecter delivery system、橙色代表Iron uptake system、红色代表Immune modulation、绿色代表Toxin、黄色代表Regulation。D 图中抗生素耐药因子含量的差异水平为P < 0.05。*代表P < 0.05，**代表P < 0.01

宿主肠道代谢物的变化和关键代谢生物标志物的功能

Variations in host metabolites and function of KMBs

Con和E9D两组中共鉴定出4789个代谢物，其中潜在代谢生物标志物 (PMBs) (VIP >1.0，P < 0.05) 有1768个 (623个上调，1145个下调)，分属17类 (图 6 A, B)；关键代谢生物标志物 (KMBs) (VIP > 1.5，P < 0.05)有491个 (189个KMBs上调，302个KMBs下调)，说明E. piscicida感染显著影响了海马的代谢过程。

通过KMBs的KEGG功能分析发现，48个KMBs富集到Cellular Processes、Drug Development、Environmental Information Processing、Genetic Information Processing、Human Diseases、Metabolism和Organismal Systems 7大功能类别，110个功能通路中 (图 6C)，其中活性显著差异的通路共有27个 (P < 0.05)，主要影响Metabolism、Environmental Information Processing、Cellular Processes、Organismal Systems和Human Diseases 5大类功能 (图 6D left panel)。相对含量Top15 KMBs中有11个（|log2FC | > 0.55且参与多个显著差异的功能通路）富集到10条代谢活性差异显著的功能通路 (P < 0.05) (图 6D)。相比Con组，E9D组中Histidine metabolism、Citrate cycle (TCA cycle)和Taurine and hypotaurine metabolism 通路中的代谢物大部分上调；ABC transporters、TCS、Ferroptosis、Glutathione metabolism 和Pyrimidine metabolism通路中的代谢物全部下调；Glyoxylate and dicarboxylate metabolism 和Butanoate metabolism通路中的代谢物大部分下调 (图 6D) 。值得注意的是， alpha-Ketoglutarate、Taurine、Glutathione、Uridine、L-Glutamate、L-Malic acid、Oxidized glutathione 8个KMBs参与调控上述多个通路 (图 6D right panel)，提示其可能是E. piscicida侵染过程中的起核心作用的KMBs。

图6 Edwardsiella piscicida侵染对海马肠道代谢物组成 (A)、差异代谢物分类 (B)和KEGG功能分类 (C) 以及关键代谢物的含量和KEGG富集功能 (D) 的影响。CP: Cellular Processes, DD: Drug Development，HD：Human Diseases，EIP: Environmental Information Processing, GIP: Genetic Information Processing, IDFC: increased or decreased fold change, VIP: Variable Importance in Projection, BAD: Biosynthesis of alkaloids derived。D中色柱颜色代表KEGG一级功能分类，绿色为Environmental Information Processing、蓝色为Cellular Processes、浅蓝色为Metabolism、橙色为Organismal Systems、黄色为Human Diseases; 圆左侧圈大小代表代谢物的数量，右侧圆圈大小代表|log2FC |

E. piscicida侵染诱发性肠炎的致病机制

Molecular pathogenesis of E. piscicida-induced enteritis 

围绕与病原密切相关的8个关键肠道菌群功能，我们找到了34个与其中6个呈极显著正相关的KVFs (P < 0.01)，其中包括15个核心VF (CVFs) 因子以及其他19个相对丰度Top50以内的VFs。如图7A所示，E9D组中，运动、粘附、入侵相关的关键或核心毒力因子相对丰度增加的同时，Flagella assembly、Bacterial chemotaxis的功能活性上调 (P < 0.01)；效应器输送系统相关毒力因子相对丰度增加的同时，Bacterial secretion system的功能活性上调 (P < 0.01)；铁吸收系统相关毒力因子相对丰度增加的同时，肠道菌群ABC transporters的功能活性显著上调(P < 0.01)，而宿主代谢生物标志物L-Proline、Taurine、Glutathione、Uridine、Xanthosine和L-Glutamate显著下调 (P < 0.05)；同样，与毒素相关毒力因子相对丰度增加的同时，Lipopolysaccharide biosynthesis的功能活性显著上调(P < 0.01)；调控相关毒力因子相对丰度增加的同时，肠道菌群TCS的功能活性显著上调 (P < 0.01)，而宿主代谢生物标志物L-Malic acid和L-Glutamate显著下调 (P < 0.05) (图 4D left panel and 图 5C and图 7A)。此外，我们发现8个可能起核心作用的KMBs中的7个可以富集到TCS和ABC transporters 2条关键肠道菌群功能通路，且呈显著的负相关性 (P < 0.05)，其中 TCS功能途径相关的L-Malic acid和L-Glutamate显著下调 (P < 0.05)；ABC transporters功能途径相关的L-Proline、Taurine、Glutathione、Uridine、Xanthosine和L-Glutamate也显著下调 (P<0.05)(图 7A)。

图 7 Edwardsiella piscicida关键毒力因子与肠道菌群核心功能和核心代谢物的相关性分析(A)及其致病机制的模式图(B)。A 中相关系数为P < 0.01, |r| > 0.8；B 中E.piscicida侵染过程大致分为6个过程：Motility、Adherence、Invasion、Replication、Avoid host defenses、Toxin release。E. piscicida侵染后通过分泌Flagella、Type IV pill和Lap等毒力因子，使其接近、附着并与宿主上皮细胞结合、使其入侵、内化到绒毛上皮细胞中；进入上皮细胞后，一方面通过分泌关键毒力因子Legiobactin、IraAB和Hpt，帮助其在营养匮乏、环境恶劣的情况下获得更多的营养物质用于生存和生长；另一方面通过分泌关键毒力因子T3SS、T6SS-1、TTSS、HSI-I、VirB/VirD和Dot/Icm，帮助其复制并扩散到邻近上皮细胞和其他组织；当局部感染加重进一步扩散并侵入到更深的组织时，会遇到吞噬细胞的吞噬，此时通过分泌Capsule、HP-NHP、FarAB等关键毒力因子分泌能够防止其被吞噬细胞吞噬；另一方面病原菌进入吞噬细胞后通过T3SS和T6SS等关键毒力因子分泌，帮助其在吞噬细胞内复制，以便逃避宿主免疫系统攻击，导致肠道屏障功能紊乱 (down regulation of Occludin and Claudin5)；成功定植的病原可以通过LPS、Colibactin和LOS等关键毒力因子的分泌，诱发炎症反应，导致宿主死亡。整个入侵过程需要关键毒力因子BopD、Phop、BfmRS协调其他毒力因子共同完成。当E. piscicida大量释放到肠腔后，可以通过提高相关病原和毒力因子的相对丰度，改变肠道菌群组成结构、功能和宿主代谢，诱发肠炎。

- 讨论 -

Discussion

病原侵染过程大致可以分为运动、粘附、入侵、复制、免疫逃避以及分泌毒素六个阶段，期间毒力因子、肠道菌群和代谢之间存在显著关联。本研究首次发现E. piscicida中34个CFVs与6种关键肠道菌群功能和7种宿主KMBs密切相关。与运动、粘附、入侵相关的关键毒力因子相对丰度的显著增加，可能通过增加Bacterial chemotaxis、Flagellar assembly肠道菌群功能通路的活性，帮助病原菌接近、粘附，并与宿主肠道上皮细胞结合，入侵或内化到肠道上皮细胞或组织中。局部感染加重时，复制过程相关的铁吸收和效应器输送系统关键毒力因子相对丰度的显著增加，一方面可能通过提高病原ABC transporters的功能活性，帮助病原菌在营养有限、环境恶劣的情况下获取营养用以生长和生存；另一方面可以提高Bacterial secretion system的活性，帮助病原菌在上皮细胞内存活和复制并扩散至邻近上皮细胞和其他组织。当病原菌向更深的组织扩散时，会遇到吞噬细胞的吞噬，此时病原菌一方面通过免疫调节(Immune modulation)关键毒力因子相对丰度显著增加，帮助其逃避吞噬细胞吞噬；另一方面一旦病原菌进入吞噬细胞效应器输送系统关键毒力因子帮助其在吞噬细胞内复制，通过上述两种方式可以帮助病原菌逃避宿主免疫系统攻击并干扰宿主黏膜及微生物屏障。病原菌成功定植后，毒素相关因子相对丰度的显著增加，可能提高病原LPS biosynthesis功能的活性，产生大量LPS导致宿主组织坏死。整个入侵过程中，调控因子相关毒力因子丰度的显著增加，可能活化TCS途径帮助病原传递信号，并根据环境条件激活合适的毒力因子，调节病原菌的转录活性，进而促使病原丰度达到峰值，诱发深度感染。

Taurine、L-Proline和Uridine具有抗菌活性，可以替代抗生素，增强宿主抵抗病原入侵的能力。因此，其含量可以表征宿主对爱德华氏属及其他病原感染的抵抗能力。L-Glutamate对于宿主维持肠道健康，提高生长性能和存活率具有重要意义。Glutathione具有抗氧化功能，可以表征宿主线粒体的产能；Xanthosine、L-Malic acid可为病原菌的生长提供碳源和能源。本研究中，上述7个KMBs参与多个代谢通路且在感染后显著下调，表明E. piscicida可以利用海马体内物质促进其自身复制和侵染的同时，抑制宿主的产能和抗病能力，可能成为表征其侵染典型代谢特征。值得注意的是，E. piscicida诱发深度感染时代谢组中ABC transporter和TCS通路相关的KMBs发生显著变化，提示毒力调控和营养物质运输系统两个系统此时发挥的重要作用。如果在病原侵染的不同阶段采用本研究的分析方式，可能有助于鉴定更多KMBs，进一步加深对致病机制的解析。最后，我们根据上述结果绘制了一幅E. piscicida入侵海马肠道诱发深度感染的模式图 (图 7B)。

Conclusion

本研究通过升级研究模型，确定了E. piscicida诱发膨腹海马细菌性肠炎的病理特征和致病模式，阐明了其关键KVFs对肠道菌群多样性、结构和功能的影响，明确了表征宿主代谢的变化和KMBs，并最终总结了E. piscicida诱发膨腹海马细菌性肠炎的发病机制。为相关疾病的预防和控制提供理论参考。

参考文献

LeLe Zhang, Fang Wang, Longwu Jia, Hansheng Yan, Longkun Gao, Yannan Tian, Xiaolei Su, Xu Zhang, Chunhui Lv, Zhenhao Ma, Yuanyuan Xue, Qiang Lin, Kai Wang*. Edwardsiella piscicida infection reshapes the intestinal microbiome and metabolome of big-belly seahorses: mechanistic insights of synergistic actions of virulence factors. Frontiers in Immunology. 2023, 14: 1135588.

- 作者简介 -

第一作者

鲁东大学

张乐乐

硕士

张乐乐，鲁东大学硕士研究生，主要关注水产免疫、肠道微生物与宿主互作。目前以第一作者在Frontiers in Immunology和热带海洋学报上发表了相关论文。

烟台毓璜顶医院

王方

医师

王方，女，2013年于北京协和医学院肿瘤学硕士研究生毕业，主治医师，现任烟台毓璜顶医院病理科主治医师。2020年4月至9月于四川大学华西医院病理科进修，擅长于消化系统、女性生殖系统及中枢神经系统肿瘤临床病理诊断，先后发表国内外论文7篇，以第一作者发表SCI论文3篇，荣获山东医学科技三等奖。

通讯作者

鲁东大学

王凯

教授

王凯，主要从事海洋生物资源与环境适应性，以及海洋珍稀动物的养殖生态学及其应用研发等相关研究。主持国家自然科学基金面上项目和青年项目，以及山东省高等学校优秀青年创新团队科技计划等项目近20项。在Nature、Nature Communications、Frontiers in Immunology、Cellular Signalling、Fish and Shellfish Immunology、Aquaculture Reports等期刊发表论文20余篇。突破制约海马北方高效养殖的设施改造、冬季开口饵料选择及大规模培养与细菌性肠炎病害防控等关键技术瓶颈，为北方海马的工厂化养殖打下了坚实基础，首位授权国家发明专利6项。