【实验技术笔记】细胞表型检测之细胞粘附（细胞粘附实验） + 细胞侵袭（transwell实验）

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1. 细胞粘附 Cell Adhesion

• 体内细胞想要运动，就要先脱离其他细胞，细胞粘附能力发生改变（细胞粘附实验）；
• 体内细胞还被细胞外基质包裹，要穿过细胞外基质，就要能降解细胞外基质组分，细胞侵袭能力发生改变（用 matrigel 的 transwell 实验来观察细胞的侵袭能力）；
• 细胞要移动，其自身还需要发生变形，细胞极性发生改变，具有迁移能力（划痕、Transwell）。

细胞粘附 Cell Adhesion

• 细胞粘附 Cell Adhesion：细胞通过直接或间接作用，与相邻细胞发生接触和相互作用。可以是通过细胞表面接触（各种细胞连接或细胞间通道）发生直接作用，也可以是通过细胞外基质产生间接作用。
  

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2. 检测细胞粘附：细胞粘附实验

细胞粘附实验（cell-adhesion assay）检测细胞粘附的原理

• 终点检测类实验：检测细胞在一个模拟基质的表面粘附的细胞数是变多还是变少了。

• 使用细胞外基质的组分（模拟细胞外基质）包被 96 孔板，接种细胞培养后，用 PBS 洗，粘附能力强的细胞就不容易洗掉，粘附能力弱的就容易被洗掉，然后用 CCK-8 孵育显色，酶标仪检测显色程度从而反应粘附的细胞数。

• 模拟细胞在体内的粘附。

细胞粘附实验的操作流程

• 适用于检测贴壁的细胞，不适用于检测组织样本（组织样本可以检测与细胞粘附相关分子的表达） 。

1. 包被培养板：10μg/ml fibronectin 纤连蛋白 或 collagen 胶原 室温包被 96 孔板 1h。（不同的包被组分可能导致不同的实验结果，需要预实验确认包被组分和浓度）
2. BSA 浸洗 ：吸去包被液，加入 200μl 热变性的 1%BSA（BSA 配好后高温高压） 在 37℃孵育孔板 1h。
3. 培养基浸洗 ：使用不含血清的培养基浸洗孔板 2 次。
4. 制备细胞悬液：含 EDTA 的胰酶消化细胞，用含血清的培养基终止消化，再用无血清培养基洗涤细胞并重悬。
5. 种板 ：细胞计数后将 3-5×10⁴ 个细胞铺在预处理好的 96 孔板中。
6. 继续培养 ：细胞培养箱中培养，时间视不同细胞而定。（预实验确认，短的 1h，长的 8-9h，或者过夜，依据细胞粘附能力而定&