直径为30至100 nm细胞外囊泡外泌体 CD9/CD63外泌体标志物

外泌体具有磷脂双分子膜结构，导致其沉降系数和蛋白质聚集体有着很大的不同。而且外泌体膜表面存在特异性膜蛋白如CD9和CD81，前者被证实和肿瘤迁移有关，后者与丙型肝炎病毒的侵染有关。而因为外泌体具有这些显著的易分离的特点，我们可以通过密度梯度离心，亲和层析等方法对外泌体进行分离和纯化。

细胞外囊泡的检测方法

目前细胞外囊泡（EVs）的检测方法主要有扫描电子显微镜、原子力显微镜、动态光散射技术、纳米微粒追踪分析术（NTA）、流式细胞仪和ELISA等，由于通量高、用时短、操作简单，ELISA和流式细胞仪是比较常用的方法。ELISA方法容易受其他可溶性抗原的干扰，而且无法知道囊泡的大小、数量等信息；流式细胞仪不仅可以检测囊泡的大小、数量，而且通过细胞特异的标记物染色可以检测囊泡的来源，将囊泡进行分类，因此，流式细胞仪理论上是进行囊泡快速、高通量、多参数检测的较优选择。然而，传统流式细胞仪针对的样本主要是细胞，散射光的检测极限通常是300-500nm，而大多数细胞外囊泡的直径都在300nm以下，由于无法与背景噪音区分，直径小于300nm的细胞外囊泡很难被检测到，因此，囊泡数量往往被低估，检测结果自然也不准确。