基于shell和qiime2一键分析扩增子多样性

#!/bin/bash
usage(){
   
	echo "Usage:
       		-i [abs_input_file_path.txt | required]
		-o [abs_output_dir | required]
		-m [abs_sample_metadata.tsv | required]
		-n [threads | defalut: 4]
		-d [dada2/deblur | choose one from above, default: dada2]
		-a [silva_fl/silva_v4/gg_fl/gg_v4 | choose one from above, default: gg_v4]
		-s [sampling depth | default: minimal frequency for using all the samples
		    Can be changed according to table.qzv]
		-p [max depth when performing alpha-rarefication curve| default:5000]
		-h [print this help info]"
	exit -1
}


#default parameters
threads=4 #default threads for processing
denoise_algo="dada2" #default algorithm for denoising data
dataname="gg_v4" #default database
p_max_depth=5000


#function for denoise data using dada2 algorithm
dada2(){
   
qiime dada2 denoise-paired \
	--i-demultiplexed-seqs ${output_dir}/paired-end-demux.qza \
	--p-trunc-len-f 0 \
	--p-trunc-len-r 0 \
	--p-n-threads $threads \
	--o-table ${denoise_dir}/table.qza \
       	--o-representative-sequences ${denoise_dir}/rep-seqs.qza \
	--o-denoising-stats ${denoise_dir}/stats.qza 
}


#function for denoise data using deblur algorithm
deblur(){
   
#merge first
qiime vsearch join-pairs \
	--i-demultiplexed-seqs ${output_dir}/paired-end-demux.qza \
	--o-joined-sequences ${denoise_dir}/demux-joined.qza
#summarize
qiime demux summarize \
	--i-data ${denoise_dir}/demux-joined.qza \
	--o-visualization ${denoise_dir}/demux-joined.qzv
#quality 
qiime quality-filter q-score \
	--i-demux ${denoise_dir}/demux-joined.qza \
	--o-filtered-sequences ${denoise_dir}/demux-joined-filtered.qza \
	--o-filter-stats ${denoise_dir}/demux-joined-filter-stats.qza
#denoise
qiime deblur denoise-16S \
	--i-demultiplexed-seqs ${denoise_dir}/demux-joined-filtered.qza \
	--p-trim-length 460 \
	--o-representative-sequences ${denoise_dir}/rep-seqs.qza \
	--o-table ${denoise_dir}/table.qza \
	--p-sample-stats \
	--o-stats ${denoise_dir}/stats.qza
}

#get parameters
while getopts 'i:o:m:n:d:a:s:p:h' opt; do
	case $opt in
		i) input_file="$OPTARG";;
		o) output_dir="$OPTARG";;
		m) metadata_file="$OPTARG";;
		n) threads="$OPTARG";;
		d) denoise_algo="$OPTARG";;
		a) dataname="$OPTARG";;
		s) sample_depth="$OPTARG";;
		p) p_max_depth="$OPTARG";;
		h) usage;;
		?) usage;;
	esac
done
#denoise directory
denoise_dir=${output_dir}/${denoise_algo}


#get qiime env name
qiime=`conda env list | grep "qiime.*" | awk '{print $1}'`
echo "qiime version: "$qiime


#print info to stdout
echo "input file path: "${input_file}
echo "output directory: "${output_dir}
echo "metadata file: "${metadata_file}
echo "threads: "$threads
echo "denoise algothrim: "${denoise_algo}
echo "database: "$dataname
echo "denoise directory: "${denoise_dir}
echo "sampling depth when performing alpha-rarefication curve: "${p_max_depth}


#activate qiime env && make directory for storing output files && preparation of optional parameters
source activate $qiime
if [ ! -d ${output_dir} ];then
	echo "creating output directory: ${output_dir} ..."
	mkdir ${output_dir}
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### 回答1: 扩增子分析流程是一种用于分析环境样品中微生物群落的方法,常用于研究微生物的多样性、结构和功能。QIIME 2是一款流行的用于扩增子分析的开源软件包,它提供了丰富的工具和流程来处理和分析扩增子数据。 QIIME 2的分析流程通常包括以下主要步骤: 1. 数据预处理:首先,需要对原始的扩增子测序数据进行质控和过滤,以去除低质量的序列和嵌入式引物。 2. 物种注释:对过滤后的序列进行比对,使用参考数据库(如Greengenes和Silva)进行物种注释,以确定每个序列的分类学归属。 3. 生成特征表:利用序列分类结果,将每个样品的序列计数编码到一个特征表中,该表记录了每个物种或OTU(操作分类单位)在每个样品中的相对丰度。 4. Alpha多样性分析:通过计算各个样品的Alpha多样性指数,如物种丰富度和均匀性指数,来评估样品内部的多样性。 5. Beta多样性分析:通过计算样品间的Beta多样性距离,如Bray-Curtis和Jaccard距离,来比较样品之间的微生物群落差异,并可视化为PCoA(主坐标分析)图。 6. 群落结构分析:使用各种统计方法,如ANOVA(方差分析)和PERMANOVA(多变量方差分析),来检测具有显著差异的物种或OTU,并识别对样品群落结构有影响的因素。 7. 功能预测:利用功能预测软件,如PICRUSt和Tax4Fun,根据扩增子数据中的物种注释信息,推断微生物群落的功能组成。 总之,QIIME 2是一种功能强大的工具,可以帮助研究人员从扩增子测序数据中获取丰富的信息和洞察力,并在微生物生态学、生物地球化学和医学等领域有着广泛的应用价值。 ### 回答2: QIIME2是一种用于从高通量测序数据中进行微生物群落分析的开源软件。扩增子分析流程是QIIME2中的一个重要模块,用于处理和分析扩增子测序数据。 扩增子分析流程主要分为以下几个步骤: 1. 数据准备:将测序生成的原始数据导入QIIME2,并进行质量控制和序列去噪。这一步骤包括对测序错误进行校正和剔除低质量序列。 2. 物种注释:通过比对序列数据库(如Greengenes或Silva)将序列注释为对应的物种或OTU(操作性分类单元)。这一步骤可以帮助了解样本中存在的微生物种类和丰度。 3. Alpha多样性分析:计算样本内的多样性指数,如Shannon指数和Simpson指数,用于评估微生物群落的多样性程度。该分析可以显示样本内微生物的丰富度和均匀性。 4. Beta多样性分析:计算样本间的多样性差异,并进行聚类分析或PCoA(主坐标分析)来展示样本间的相似性和差异性。这一步骤可以帮助分析群落结构的相似性和差异性。 5. 物种组成分析:通过计算不同样本间的物种组成差异,使用统计学方法(如ANOVA或PERMANOVA)来鉴定群落结构差异的显著性。这一步骤可以帮助了解不同条件下微生物群落的变化。 6. 功能预测:根据16S rRNA序列或ITS序列的相对保守性,通过推断出的物种信息,对微生物群落的功能进行预测,并探索样本中存在的功能差异。 通过上述步骤,扩增子分析流程可以帮助研究人员了解微生物群落的组成、丰度、多样性和功能,从而探索微生物与宿主或环境的相互作用。

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