解惑 | 逆转录时到底要不要去除gDNA？

导读

现在很多逆转录产品都带有去gDNA功能，那么在逆转录时为什么要去除gDNA呢？逆转录产品去除gDNA的原理是什么呢？如果逆转录时不去除gDNA会有什么样的后果呢？本文将会详细的为大家解答这个问题。

基因在不同组织、发育阶段、处理条件下的差异表达，可能会反映基因的功能以及被调控的机制，因此基因表达定量研究是生物学研究中最基础的内容之一。常用的基因表达量研究方法是RT+qPCR，即先将RNA逆转录成cDNA，再用qPCR对cDNA进行定量，特定基因cDNA的丰度能够反映出其mRNA的丰度，也就是基因的转录表达水平。

为什么要在逆转录时去除gDNA？

很多时候，我们提取到的RNA可能会混有gDNA（基因组DNA），而用这种有gDNA污染的RNA模板逆转录时，cDNA产物中也会混有gDNA。cDNA和gDNA在qPCR反应中可能会被同时扩增，我们无法区分荧光信号是来自于cDNA还是gDNA，因此cDNA的定量结果可能会存在偏差。特别是低表达量的基因，本身的扩增信号低，Ct值大，更加容易受到gDNA污染的影响。因此，如果能够在逆转录的时候，加一步gDNA去除的步骤，能够有效的降低gDNA污染的影响，增加实验的可信度。

逆转录产品去除gDNA的原理

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