定点荧光标记蛋白：轻松搞定CAR-T阳性率检测

CAR-T细胞疗法在8月份提前进入“丰收季”。8月27日NMPA官网公示，**国内第五款CAR-T细胞疗法——来自传奇生物的西达基奥仑赛注射液获批上市。**这款靶向BCMA的细胞疗法用于治疗复发或难治性多发性骨髓瘤（R/R MM）成人患者。同一天，药明巨诺靶向CD19的瑞基奥仑赛注射液新适应症上市申请获得批准，用于治疗成人复发或难治性套细胞淋巴瘤（R/R MCL）。

与传统药物不同，CAR-T在静脉注射给药后会分布在各个器官。在CAR与肿瘤靶点结合后，CAR-T细胞被激活并增殖，一般在2周内达到峰值，之后根据个体差异呈现不同程度的下降趋势，因此CAR细胞阳性率是CAR-T产品活性的关键指标之一。

CAR细胞阳性率检测贯穿CAR-T疗法始终，是其质量控制的“基石”。

在研发阶段，为确保CAR结构改进能最大化的提高缓解率，需要对CAR阳性细胞的数量和比例进行检测。在CAR-T生产过程中的质量控制、临床试验监测以及患者体内扩能和存活能力等各阶段均需检测细胞活性。因此CAR-T细胞治疗产品从临床前研究到患者治疗后随访，都需要CAR阳性率检测。

**选择合适的技术是构建CAR阳性率检测的基础。**目前实验室常用的检测技术有聚合酶链式反应（PCR）、流式细胞术（FCM）、抗独特型抗体等。

流式细胞术（FCM）基于荧光标记，对细胞进行多参数、快速定量分析及分选。FCM具有高通量快速分析优势，每秒可达10万个细胞，并且分选纯度在99%以上。同时还能检测多种细胞信息，如细胞群的比例、数量、T细胞功能、免疫分型、蛋白丰度等，进而判断特定细胞类型及其蛋白丰度。

**利用荧光标记蛋白与细胞表面重要标志物特异性结合的特性，进行流式细胞术检测，是现阶段普遍公认的主流检测技术。**然而，荧光标记蛋白的选择面临诸多挑战。传统化学标记是主要的蛋白标记技术，但批间一致性差，检测结果不稳定，影响对治疗效果的评估。此外，传统化学标记蛋白易聚集，检测时可能产生非特异信号。因此，开发高活性、高批间一致性的荧光标记蛋白对细胞检测尤为重要。

基于以上需求，义翘神州凭借其特色定点标记技术平台，成功开发了一系列专为CAR细胞检测打造的定点标记蛋白产品，荧光标记类型多样，涵盖PE、APC、AF 488、AF 647等，全方位满足不同研究需求，如细胞药物质控和检测、抗体筛选、蛋白互作研究等。

义翘神州定点标记蛋白：

****义翘神州定点标记蛋白优势**** 
★ 在某一特定氨基酸上标记； 
★ 在特定位置标记； 
★ 标记数量确定； 
★ 保持天然构象和活性 
★ 批内高度均质性 
★ 批间高度一致性

详细验证数据

特异性灵敏度高（Cat#: 11880-H08W1-SG）

AF 647荧光定点标记CD19蛋白经FCM验证可高特异性检测CD19 CAR细胞。

Flow cytometric analysis of anti-CD19 CAR expression. 293 cells were lentivirally transduced with anti-CD19 CAR. Flow cytometric analysis was performed with a negative control protein and AF 647-conjugated human CD19 protein (Cat#: 11880-H08W1-SG), respectively. Non-transduced 293 cells were used as a control (left) (QC tested).

非特异性背景低（Cat#: 11880-H08W1-SG）

AF 647荧光定点标记CD19蛋白经未转染CAR的PBMC细胞验证，无特异性背景，保证CAR表达检测结果的特异性和准确性，适用于CAR细胞阳性检测。

Binding activity of AF 647-conjugated CD19 protein (Cat#: 11880-H08W1-SG) to PBMC cells. PBMC cells were stained with anti-CD3 antibody and AF 647-conjugated human CD19 protein and detected by flow cytometry. PBMC cells stained with anti-CD3 antibody were used as a control (left) (QC tested).

批间一致性稳定（Cat#: 11188-H86H-SD）：

标记前后蛋白活性、不同批次的标记蛋白之间活性保持一致

Comparison of ELISA activity between pre-conjugation and different batches of site-specific AF 488 conjugated B7-H3 (Cat#: 11188-H86H-SD) (routinely tested).

稳定性高（Cat#: 11188-H86H-SD）

经多次冻融和加速稳定性测试，仍保持较高生物活性

The B7-H3 protein (Site-specific conjugation, ECD, His tag. Cat#: 11188-H86H-SD) showed no performance reduction on flow cytometry after multiple freeze-thaw cycles (0, 5, 10 cycles) and two weeks (Day 0, Day 7, Day 14) of storage at 37℃ (routinely tested).

纯度高（Cat#: 10001-H86H-SD）：

标记前后产品纯度均高于90%

The purity of site-specific AF 488 conjugated EGFR Protein (Cat#: 10001-H86H-SD) is more than 90 % as determined by SDS-PAGE and SEC-HPLC (routinely tested).

免责声明：义翘神州内容团队仅是分享和解读公开的研究论文及其发现，专注于介绍全球生物医药研究新进展。本文仅作信息交流用，文中观点不代表义翘神州立场。随着对疾病机制研究的深入，新的实验结果或结论可能会修改或推翻文中的描述，还请大家理解。
本文不属于治疗方案推荐，如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。