激光共聚焦如何选择荧光染料

荧光染料选择指南

随着生命科学的不断发展，大量荧光染料在细胞成像和流式细胞术分析等方面发挥着举足轻重的作用。

荧光染料吸收某一波长的光波后可发射出另一波长的光波，吸收光和发射光的波长构成了荧光染料的激发和发射光谱（简称为荧光染料光谱）。

所有需要使用荧光染料的仪器都会配备激光器，激光器产生一定波长的光，从而激发可以吸收此波长光的荧光染料，荧光染料被激发，发射出的光通过滤光镜后被仪器识别，值得注意的是每个通道只能检测到一定范围内的一个荧光信号。

各个光谱范围内的荧光染料形形色色，实验时我们该如何选择这些荧光染料呢？

1. 根据仪器选择荧光染料：
   1. 每个通道只能选一种荧光染料，且波长在激光器波长范围内；
   2. 发射的光谱必须在仪器的滤光片能够接受的合适范围内；
2. 需要两种及以上荧光染料的多色实验中，各通道间的荧光染料可任意搭配，但光谱重叠应尽量减少；
3. 表达量较低的抗原需选择信噪比较高的荧光染料，如藻红蛋白（R-Phycoerythrin, R-PE）；
4. 检测自发荧光较高的细胞时，选择发射光波长较长的荧光染料，如Cy系列染料，可获得更好的信号值。

常用荧光染料光学特征如下：

注：1、蓝色（350-450nm处激发） 2、绿色（488nm处激发） 3、橙黄色（543-555nm处激发） 4、红色（568-594nm处激发） 5、远红外（620-660nm处激发） 6、近红外（680-790nm处激发）

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