HPLC鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题解析

HPLC鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题解析

高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法，这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题，如何解决这些问题呢?

1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?

关于漂移问题：

①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定;

②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等;

③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡;

关于快速变化问题

①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定;

②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出;

③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合;

2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子;

②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子;

③可能柱超载，减少进样量;

3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

①样品量不足，解决办法为增加样品量;

②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子;

③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器;

④检测器衰减太多。调整衰减即可;

⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数;

⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗;

⑦检测池中有气泡。解决办法为排气;

⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可;

⑨流动相流量不合适。调整流速即可;

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?

①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理;

②比例阀失效，更换比例阀即可;

③泵密封垫损坏，更换密封垫即可;

④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法;

⑤系统检漏，找出漏点，密封即可;

⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么?

这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力，尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ods填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ods柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如，三乙基胺(tea)，将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。

6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么?

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查;

②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查;

③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时，不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池)。这时，如果柱压仍不下降，再检查;只用于使用过的柱子。

④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，sge提供的rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

7.色谱双峰产生的可能及判断和处理?

HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下(不包括梯度)，峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。

①色谱柱

如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现(出峰越快，双峰的可能性会减少)，尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题-柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱