![f5d929949ee4d2d83e92cf900b6e40ac.gif](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/3c565afd75da146eb492ca8bfb4fbf7f.gif)
RNA质量鉴定:纯度、得率、完整性
1、纯度(OD260/OD280)
OD260/OD280<1.9说明有蛋白污染;
OD260/OD280=1.9—2.1说明纯度良好;
OD260/OD280>2.1说明有部分降解。
2、得率(OD260)
Yeild=OD260x稀释倍数x40ng/ul
3、完整性
完整的RNA电泳条带有3条,但通常会看到28s和18s rRNA,如果RNA没有降解,28sRNA的亮度大约是18srRNA的两倍,也应当可以看到一条由tRNA、5.8S rRNA和5srRNA组成的,该条带较模糊迁移较快。
1%琼脂糖,6V/cm,15min,上样1-3ul
![f5d929949ee4d2d83e92cf900b6e40ac.gif](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/3c565afd75da146eb492ca8bfb4fbf7f.gif)
RNA纯度高≠完整性好
上图第6、7、8样品OD260/280分别是1.99、2.0和1.89。但下图电泳结果显示实际上第6、7、8样品RNA已经降解了。此时用降解的RNA跑qPCR就很可能会出现内参的Ct偏高。
![f5d929949ee4d2d83e92cf900b6e40ac.gif](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/3c565afd75da146eb492ca8bfb4fbf7f.gif)
核酸电泳就用WIX水平电泳仪
*尺寸大,条带分离的更清晰,效果更好;
*电极架采用卡扣卡紧方式,电泳槽底部无开孔,杜绝漏缓冲液,更换只需要几秒钟;
*电源线采用卡扣卡紧方式,更换方便
![f5d929949ee4d2d83e92cf900b6e40ac.gif](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/3c565afd75da146eb492ca8bfb4fbf7f.gif)
WIX水平电泳仪
![f5d929949ee4d2d83e92cf900b6e40ac.gif](https://i-blog.csdnimg.cn/blog_migrate/3c565afd75da146eb492ca8bfb4fbf7f.gif)
EB替代物:CelGreen
产品介绍:
CelGreen是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有独特涉及的荧光染料。在游离状态下侧链、CelGreen发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强,因此CelGreen的荧光信号强度与双链DNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。
产品优势:
*无毒性:CelGreen 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,CelGreen的诱变性远小于EB。
*灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
*稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。
*信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
*操作简单:在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用可见光凝胶透射仪观察。
*适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
聚研好物推荐
WIX水平电泳仪
广州现货
联系方式
广州聚研生物科技有限公司
4001-147-991(电话/QQ同步)
(要试剂,就聚研)
聚研生物 代理品牌
正规代理 品质保证