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如何判断 qPCR 数据有效性
通常需要结合扩增曲线,溶解曲线,标准曲线来进行综合分析。
- 扩增曲线应呈现出平滑的S型曲线,起始无扩增,起峰时间正常,能达到平台期。由扩增曲线得到的Ct值是判断实验成功与否的重要参考,Ct值有一定的可信范围,一般建议,阳性结果(科研)调整到15-30之间,阴性对照Ct>35,内参基因一般小于20,且样品间内参的Ct值差不超过 1,表明内参基因表达量稳定,复孔Ct值标准偏差不超过 0.5。
- 溶解曲线应呈现单峰,峰的宽度较小,表明是特异性扩增。
- 标准曲线