storm显微镜成像原理_3i 显微镜 | 有图有真相系列之晶格光片超分辨显微镜

本期，我们的主角是：Lattice LightSheet—晶格光片超分辨显微镜。

生命的精彩之处在于其不断的变化。随着显微镜的发展，人们能从越来越小的尺度上观察到这个变化的过程。曾几何时由于光学衍射极限的存在，显微镜的分辨率被限制在了200nm，使得观察亚细胞结构成为了困难。人们无法观察到细胞内部小于200nm的结构变化。1994年Stefan Hell首次提出了超分辨成像的构想，经过多个研究小组十多年的努力，多种超分辨显微成像技术已然趋于成熟。2014年诺贝尔化学奖更是颁发给了在此领域作出杰出贡献的三位科学家：Eric Betzg, Stefan Hell以及William E. Moerner。

三位2014年诺贝尔化学获得者：Eric Betzg（左）, Stefan Hell（中）以及William E. Moerner（右）

虽然基于单分子定位（STORM/PALM）与受激发射损耗（STED）的超分辨显微成像技术提供了令人振奋的超高分辨率，但其牺牲了活细胞实时成像最关键的成像速度与光毒性。2014年同年Eric Betzg完成了晶格光片超分辨显微镜的研究。在使用光片照明的基础上，Eric Betzg使用贝塞尔光束作为光源，并通过空间光调制器（SLM）在贝塞尔光上形成晶格，使得光片照明的厚度从4微米减少至400纳米。在提高了成像轴向分辨率的同时更是大大减少了光毒性。

（a）高斯光在物镜后孔径的强度分布，焦点的强度分布，光片的强度分布。

（b）贝塞尔光在物镜后孔径的强度分布，焦点的强度分布，光片的强度分布。

（c）晶格贝塞尔光在物镜后孔径的强度分布，焦点的强度分布，光片的强度分布。（Science,2014）

此外，通过结合晶格的结构与样品产生的莫尔条纹，Eric Betzg更是利用结构光照明（SIM）超分辨成像技术将光片显微镜的横向分辨率超过了光学衍射极限，此工作在2014年被发表在了著名的期刊SCIENCE上。由于光片显微镜本身极低的光毒性与成像速度，在结合上了超分辨成像的空间分辨率后，晶格光片显微镜成为了目前唯一真正意义上的活细胞超分辨实时成像显微镜，为观察细胞层面上的实时结构变化提供了关键的技术支持。

普通晶格光片成像与超分辨晶格光片成像的对比

Eric Betzg本人更是认为，从某种意义上来说晶格光片超分辨显微镜在重要程度上更胜于他获得诺贝尔化学奖的PALM技术。

以下是Lattice LightSheet显微镜的部分应用：

Lattice LightSheet Hela Cell

Lattice LightSheet Slime Mold

Lattice LightSheet Autophagosome

Large Macrophage

LifeactGFP cancer cell

3i (Intelligent Imaging Innovations)致力于设计和制造最先进的活细胞和活体显微镜成像平台, 而上海仁科生物致力于引进全球各种优秀的仪器设备，为科研工作者提供全方位的实验室平台搭建方案。如果您想了解更多3i 显微镜的信息，欢迎致电(021)34250079或者给我们发邮件，邮箱marketing@bio-star.cn

参考文献：

Latticelight-sheet microscopy: Imaging molecules to embryos at high spatiotemporalresolution[J]. Science, 2014, 346(6208):1257998-1257998.