Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line（宾夕法尼亚州立大学）
介绍：由于基因的差异，动物模型实验对人体来讲参考意义有限。其他常用的人体细胞实验由于分化的混乱，不利于研究。SY5Y就非常棒了，它可用RA、phorbol esters（佛波酯）、BDNF等物质进行诱导。不同的方法可以将其诱导分化为肾上腺素能，胆碱能，多巴胺能神经元等（16/17）。
未分化的SH-SY5Y增殖迅速、呈非极化，很少有短过程（with very few, short processes）成块生长表达未分化的标志物（18/19）。当分化时分支延长、增殖减缓，部分情况下极化。分化成熟的SY5Y可以表达多种成熟神经元的标志物：growth-associated protein (GAP-43), neuronal nuclei (NeuN), synaptophysin (SYN), synaptic vesicle protein II (SV2), neuron specific enolase (NSE) and microtubule associated protein (MAP)（2,16,17,20）胶质标记物如胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达缺失。分化了的SY5Y缺少BDNF，导致凋亡。这说明分化的SY5Y和成熟神经元一样依赖BDNF。可用来研究AD/PD和脊髓灰质炎病毒22，肠病毒71 (EV71)23,24，水痘-带状疱疹病毒(VZV)1，人巨细胞病毒25，单纯疱疹病毒(HSV)等病毒的感染机制。神经病毒学领域多使用未分化的SY5Y作为研究工具。那么，分化的SY5Y和未分化的SY5Y的相同实验的表现中是否相同呢？因此，在设计以体外检测神经元为重点的实验时，为获得与体内模型最准确的转译和比较结果，关键是要使用分化了的SH-SY5Y细胞。
分化培养：35mm2培养皿中，加入2ml细胞浑浊液，密度为50000cells/ml。
讨论：RA用于诱导SH-SY5Y分化成为多巴胺能神经元。
用Anti-SMI31和Anti-MAP2(red)染特异性蛋白。
RA可以避光保存6周，神经元分化成熟后会维持2周的后期分化并可用于实验。高传代的细胞不利于分化。在分化的过程中会损失大约40%的细胞，因此每个35 mm2的培养皿接种100000个cells，具体的接种数量可以上下调节。
总结：通过这篇文章，我知道了SY5Y经RA诱导分化为多巴胺能神经元，学到了具体的诱导方法，用Anti-SMI31和Anti-MAP2(red)染特异性蛋白。