Retinoic acid-induced differentiation of cultured human neuroblastoma cells: a comparison with phorb

（瑞典乌普萨拉大学，前100， 1区 1984年）
文章研究的是ATRA与phorbolester（佛波酯）分别诱导SY5Y分化的不同。
RA和TPA联合处理的细胞形态分化，生长受到抑制，神经元特异性烯醇化酶相对活性较高。RA对TPA诱导的去甲肾上腺素浓度升高具有浓度依赖性的抑制作用。另一方面，经RA、TPA或RA和TPA联合处理的细胞表型确实存在差异,沿着不同的途径分化。SH-SY5Y是肾上腺素能细胞，培养过程中每周换液两次。用乙醇溶解TPA（佛波酯），乙醇的最终浓度不超过0.1%（这个浓度对SY5Y的生长不会产生影响）。2ml共5*104个Cells接种到φ35的培养皿中。采用离子交换色谱法分离了三种烯醇化酶同工酶（含有烯醇化酶活性的三个部分（可能是指烯醇化酶的三种亚单位α、β和γ）与非神经元烯醇化酶(I)相关，非神经元烯醇化酶与NSE (II)和NSE (III)之间的杂交产物，均以总烯醇化酶活性的百分比表示。），测了NSE（神经元特异性烯醇化酶，elabscience公司有检测盒）。

又测了去甲肾上腺素（NE或NA）
形态学观察：10-7M（一般认为10^5-7为佳）RA诱导十天（106cells/φ8.5培养皿），每周换液两次。突触大于50nm的细胞认为已分化。
诱导分化的可逆性：在RA诱导4天后，添加RA-free培养基，第6天与添加RA培养基培养的细胞比，增值无明显差异（但仍有部分呈分化状态）。第九天时，RA-free细胞增长率与congtrol组一样。第9天时，NSE相关染色十分微弱。
讨论：诱导培养细胞分化的研究需要可靠的标志物来区分分化表型和与诱导分化无关的变化。特别是当诱导因子在微分过程中有一个未定义的函数时，这一点尤为重要。细胞过程的发展和细胞生长的抑制可以作为神经母细胞瘤细胞诱导分化的两种早期指标，但这两种变化对这些细胞的分化状态不一定是唯一的。因此，RA处理后细胞生长的抑制和细胞过程的发展与两种生化分化标志物的变化有关。由于RA处理诱导NSE的相对活性增加，去甲肾上腺素的浓度略有增加，根据形态学和生化标准，细胞出现分化。RA和TPA处理的SH-SY5Y细胞表型并不相同。RA诱导的SY5Y NE的浓度是TPA的50-100分之一。有可能RA诱导的细胞产生的NE转换成了其他物质。人类肿瘤细胞经RA或TPA治疗后向不同功能方向分化的可能性在HL-60细胞中得到证实。神经元的分化具有改变神经递质的能力。NSE用免疫细胞化学方法检测。RA处理后的SY5Y表型是可逆的，但仍有部分（7%）的细胞呈分化状态。作者推测由RA诱导分化的部分细胞失去了表型（施加磁刺激之后会如何？）。Bennett(1983)的研究结果支持了我们的结论。Bennett(1983)的研究结果表明，分化(色素)的小鼠B16C3黑色素瘤细胞可以去分化并恢复有丝分裂。逆转的频率与色素沉积呈负相关。