转录组测序分析项目及方法汇总(更新中)

转录组测序分析项目及方法汇总
基于生工教学手册-从0开始解读转录组整理

1、常见测序成分及差异分析,可视化方法。

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转录组测序分析项目及方法汇总
项目 方法 工作环境
PCA主成分分析 vegan package R package

PCoA

主坐标分析

vegan package R package
NMDS
非度量多维尺度法
(用以降维分析保留次第关系)

Vegan package

样本距离:bray curtis

聚类树构建:hclust

R
样本间间距箱线图
样本间距离热图
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通过转录测序评估肿瘤突变负荷的技术路线一般如下: 1. 样本采集和RNA提取:首先需要从肿瘤织和正常采集样本,然后提取RNA。RNA提取需要进行质量检测,确保RNA的完整性和纯度。 2. 转录测序:接下来需要对RNA样本进行测序,一般使用Illumina HiSeq或NovaSeq平台进行测序转录测序需要进行质量控制和去除低质量序列。 3. 数据预处理:转录测序数据需要进行预处理,包括去除低质量序列、去除接头序列、去除rRNA序列、去除重复序列等步骤。 4. 转录本定量:使用转录测序数据进行转录本定量,一般使用RSEM、Kallisto、Salmon等工具进行转录本表达量计算。 5. 突变检测和注释:使用转录本定量数据进行突变检测和注释,一般使用Mutect、VarScan、GATK等工具进行突变检测和注释,同时需要进行过滤和筛选,去除假阳性突变位点。 6. 肿瘤突变负荷计算:使用突变位点和转录本表达量数据计算肿瘤突变负荷,一般计算方法为TMB = 突变数/覆盖的基因大小,单位为Mb。 7. 数据分析和解释:根据计算得到的肿瘤突变负荷数据,进行数据分析和解释,例如与临床特征和预后相关性的分析。 需要注意的是,转录测序评估肿瘤突变负荷可能会受到样本来源、测序平台、数据处理等因素的影响,因此需要进行标准化和质量控制,确保数据的可靠性和准确性。

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