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编译：王慧 校稿：袁凌
论文ID
原名：The storage compounds associated with Tetrasphaera PAO metabolism and the relationship between diversity and P removal
译名：Tetrasphaera PAO 代谢中的储能物质与微生物多样性及除磷效能之间的关系
通讯作者：Adrian Oehmen
通讯作者单位：
a. School of Chemical Engineering, The University of Queensland, St Lucia,Queensland, 4072, Australia;
b. UCIBIO-REQUIMTE, Departamento de Química, Faculdade de Ciˆencias eTecnologia, Universidade NOVA de Lisboa, 2829-516 Caparica, Portugal
期刊：Water Research
发表时间：2021
研究背景
在强化生物除磷系统中，Tetrasphaera是一种丰富而重要的聚磷微生物(PAO)，与传统的聚磷微生物Accumulibacter相比，Tetrasphaera编码了I型多聚磷酸盐激酶基因（催化聚磷（poly-p）的 合成）以及II型多聚磷酸盐激酶基因（促进聚磷（poly-p）的降解及后续ATP的产生）。但目前学界对其储能物质、除磷能力和代谢行为方面的研究仍存在许多空白。此外，从系统进化上而言，Tetrasphaera与Accumulibacter相同，均由多个分支组成， 不同的分支组成也可能对生物除磷的效能有影响。本研究探讨了(1)Tetrasphaera不同分支多样性对生物除磷效能的影响;(2)氨基酸在Tetrasphaera富集体系厌氧代谢过程中的作用。
研究方法
1、运行序批式反应器
反应器的体积为2L，接种污泥来自先前的研究（qFISH表明Tetrasphaera的丰度为80%）；投加的碳源为钠酪蛋白水解物；运行周期为8h（厌氧4h，沉降45min，排水15min，好氧3h），水力停留时间和污泥停留时间分别为16h和20天。
2、Batch实验
a: 酪蛋白水解物作为单一碳源；b: 22种氨基酸的混合物作为唯一碳源；c: 实际污水作为碳源。Batch实验的反应器运行参数与主反应器相同，实验期间每隔一小时取一个样品。
3、水质参数分析
采用连续流动分析仪测定P，poly-P和氨氮；采用气相色谱测定VFAs，糖原，PHA；采用TOC分析仪测定TOC含量；采用标准方法测定TSS及VSS；利用液相色谱（HPLC）测定胞外及胞内的氨基酸含量和组分。
4、微生物特征分析
采用定量荧光原位杂交（FISH）表征及分析反应器内的微生物群落。
5、化学计量
动力学计算以及能量评估。
结果与讨论
1、微生物群落的组成及丰度
在反应器运行的第210天，利用FISH表征了微生物群落的组成和丰度，结果表明体系中Tetrasphaera的丰度为95%，由三个clade组成，其中clade II 占比为68.2±13.1%。本研究中反应器的进水组成与接种反应器相同，但是体系中占主导的Tetrasphaera所属clade却发生了明显变化（接种污泥反应器中Tetrasphaera的丰度为70~80%，主要由Clade I和Clade III组成。这可能与反应器的运行工况不同有关。建议开展后续的研究探讨影响Tetrasphaera富集及除磷效果的影响因素，为提升实际污水处理厂工艺稳定性和效能提供指导。
2、反应器运行效能
本文将反应器运行过程中Tetrasphaera丰度为95%的微生物群落的运行效能与接种污泥反应器时Tetrasphaera的丰度为70~80%的微生物群落的运行效能进行比较。结果表明，70%Tetrasphaera+22%Accumulibacter的微生物群落组成具有更好的厌氧释磷/好氧吸磷的效能。进一步，通过TOC的消耗，糖原，PHA的产生以及P的去除效能评估了95%Tetrasphaera的微生物群落的除磷过程。结果表明，随着有机物被消耗，PHA的含量上升，推测该微生物群落可能利用PHA作为中间储能物质。
图1. 95%Tetrasphaera和70%Tetrasphaera+22%Accumulibacter组成的微生物群落的磷去除曲线。
图2. 95%Tetrasphaera 组成微生物群落在一个运行周期内的效能。
3、批次实验结果
分别利用酪蛋白水解物和氨基酸混合物作为唯一碳源，实验结果表明两组实验在厌氧段的磷释放/碳吸收比值分别为0.21 P mmol/C mmol和0.19 P mmol/C mmol，此外，在95%Tetrasphaera的实验组中观察到了有PHA产生，但其组分主要是PHV。利用实际污水作为唯一碳源，试验结果表明，95%Tetrasphaera的实验组具有更高的磷释放/碳吸收比值，但是其并不能完全实现磷的去除，这表明Tetrasphaera clade II 中有一部分微生物也许对水厂的脱氮除磷没有贡献。
4、氨基酸代谢与能量守恒评估
比较22种氨基酸的消耗情况，结果表明，在厌氧条件下， 95%Tetrasphaera的微生物群落首先会将氨基酸转化为谷氨酸和天冬氨酸进而进行下一步代谢，因此推测其可能是中间的储能物质。通过ATP的产生和消耗对95%Tetrasphaera的微生物群落的除磷过程进行了评估，结果表明poly-P的降解是提供微生物摄取底物所需ATP的主要来源。
图3. 分别以酪蛋白水解物和氨基酸为唯一碳源时，95%Tetrasphaera微生物群落在一个周期内的运行效能。
图4. 以实际污水为碳源时，95%Tetrasphaera微生物群落在一个周期内的运行效能。
图5. 95%Tetrasphaera微生物群落对氨基酸的代谢情况。
图6. 推测的95%Tetrasphaera微生物群落在厌氧条件下对氨基酸的代谢途径。
图7. 微生物群落组成对反应器P去除效能的影响。
结论与意义
本研究以混合氨基酸为碳源通过好氧/厌氧交替的方式获得了丰度为95%的Tetrasphaera微生物群落，其主要由CladeII组成，包含有少量的CladeI和CladeIII，几乎没有Accumulibacter PAOs, Competibacter GAOs 或 Defluviicoccus GAOs被发现。与以往研究相比，95%Tetrasphaera的微生物群落的除磷效果相对较低，这可能与不同的Clade的组成有关，此外，在其代谢过程中并未发现PHV的生成和消耗，因而氨基酸可能是其中间的储能物质，poly-P的水解是其进行厌氧底物摄取主要的能量来源，同时发酵过程也可能帮助其厌氧过程的维持。本研究让我们进一步了解了Tetrasphaera属内多样性以及其代谢路径对EBPR处理效能的影响，为实际污水处理厂的效能优化提供了指导。
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