导读
外泌体 RNA(exosomal,exRNA) 能够介导细胞间通讯,并作为生物标志物和治疗剂应用于临床,在癌症研究展现出广阔前景。
近年来,肿瘤循环 miRNA 标志物的研究如火如荼,但由于外泌体 mRNA(exosomal messenger RNA,emRNA)存在形式的不确定性,增加了 emRNA 研究的难度,使得目前 emRNA 的报道知之甚少。
(DOI: 10.1186/s12943-021-01349-z)
研究策略
图1 研究思路
样本类型:血浆外泌体、组织
检测平台:mRNA-seq
检测策略:
1、IGV 比对组织和外周血外泌体 mRNA-seq 测序数据中 reads 的覆盖度,确定变异丰度;
2、针对候选 mRNA 外显子区设计多对引物,挑选 RT-PCR 验证中具有特异性条带的引物,由于后续 emRNA靶向验证引物。
结果展示
图2 emRNA 验证流程(左)和诊断模型 ROC曲线 (右)
研究通过 mRNA-seq 检测了 31 例 PCa 患者和 17 例良性前列腺增生( BHP )个体外周血来源的 emRNA 表达情况。与组织 mRNA 表达谱相比,两组数据显示出良好的一致性。
研究使用 mRNA-seq 平台对 emRNA 前期筛选发现,与 BHP 组相比, PCa 组中共找到 281 个显著上调的 emRNA (p<0.05,FC>2),经 LASSO 回归进一步筛选共得到 9 个 emRNA,以及另 4 个上调的emRNA,用于后续验证。
使用 qPR-PCR 对上述得到的 13 个 emRNA 扩大样本验证。首先,在 10 对 PCa 和 BHP样本中对 13 个 emRNA 进行 qRT-PCR 初步验证,排除了3个与RNA-seq不一致的emRNA( TXK、ATM 和 TOX4 )。接着,在 76 例 PCa 患者和 84 例 BHP 样本中对剩余10个emRNA进行进一步qRT-PCR验证,结果发现其中有4个 emRNA (STK4、GRK5、RASSF5 和 FAM228B )的表达在两组中并未检测到差异,进一步排除。
最后,对剩余6个emRNA(CDC42、IL32、MAX、NCF2、PDGFA 和 SRSF2 )在 141 例 PCa 患者和 170 例BHP 样本以及 30 例正常人中进一步验证,结果发现这 6个 emRNA无论相对于 BHP 组还是正常组,PCa 组中表达均显著上调( p = 10-4 )。使用多因素逻辑回归对 6 个 emRNA 联合建模,该模型区分 PCa 患者和正常人( AUC = 0.948 )以及 PCa 患者和 BPH 患者( AUC = 0.851 )都展示出优异的诊断性能。
ABclonal
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