宏转录组测序数据菌株层面的分析软件总结

2022年的最后一周,为大家分享一下最近分析meta-transcriptome数据的一些心得吧。首先需要说明一点,我做的是菌株层面 (Strain Level) 的数据分析,
Strain level 是Species level的下一层级的分类;

而宏基因组/宏转录组涉及到菌株分析的内容,主要包括三块:

  • SNP Calling, 就是找SNP的意思啦,找出菌株的变异位点,除了SNP,有些软件还能做CNV呢
  • Deconvolution of different strains in samples,解析出样品里面的菌株组成,这个其实挺考验软件的能力的(因为,大多数软件是利用已有数据库的代表性菌株的序列/marker gene来做组成鉴定,很少能有软件预测新的菌株组成)
  • Relative abundance,这个就是指-对不同类型的菌株在样品中的相对丰度进行定量啦

常见的菌株分析软件

菌株分析软件倒是蛮多的,但是各有各的特点。Frontiers 的一篇综述 ,列了好多款软件出来,当然我并没有所有的软件都去看🤣,我主要看了几款经典的软件:
table for strain level analysis
下面就一个一个的来说说这些软件吧!
未完待续。。。

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通过转录测序评估肿瘤突变负荷的技术路线一般如下: 1. 样本采集和RNA提取:首先需要从肿瘤织和正常织中采集样本,然后提取RNA。RNA提取需要进行质量检测,确保RNA的完整性和纯度。 2. 转录测序:接下来需要对RNA样本进行测序,一般使用Illumina HiSeq或NovaSeq平台进行测序转录测序需要进行质量控制和去除低质量序列。 3. 数据预处理:转录测序数据需要进行预处理,包括去除低质量序列、去除接头序列、去除rRNA序列、去除重复序列等步骤。 4. 转录本定量:使用转录测序数据进行转录本定量,一般使用RSEM、Kallisto、Salmon等工具进行转录本表达量计算。 5. 突变检测和注释:使用转录本定量数据进行突变检测和注释,一般使用Mutect、VarScan、GATK等工具进行突变检测和注释,同时需要进行过滤和筛选,去除假阳性突变位点。 6. 肿瘤突变负荷计算:使用突变位点和转录本表达量数据计算肿瘤突变负荷,一般计算方法为TMB = 突变数/覆盖的基因大小,单位为Mb。 7. 数据分析和解释:根据计算得到的肿瘤突变负荷数据,进行数据分析和解释,例如与临床特征和预后相关性的分析。 需要注意的是,转录测序评估肿瘤突变负荷可能会受到样本来源、测序平台、数据处理等因素的影响,因此需要进行标准化和质量控制,确保数据的可靠性和准确性。

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